miR-19b通过激活Akt信号通路保护心肌细胞凋亡

[目的]基于新生大鼠心肌细胞氧糖剥离再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfu-sion, OGD/R)模型,研究miR-19b对心肌细胞凋亡的调控作用,并初步说明其分子机制.[方法]采用酶解法提取新生大鼠心肌细胞,分别转染mi R-19b模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),然后对细胞进行氧糖剥离再灌注处理,模拟心肌缺血再灌注损伤过程.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿甘(2’-deoxyuridine 5’-triphosphate, dUTP)缺节末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP-biotin nick endlabeling, TUNEL)法,检测心肌细胞凋亡.采用蛋白质免疫印迹法检测凋亡蛋白(Bcl2, Bax和Caspase3)以及下游分子同源磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog, PTEN)和Akt的表达.[结果] TUNEL染色表明, mi R-19b mimics可以明显降低OGD/R模型中凋亡心肌细胞比率,而miR-19b inhibitor作用则相反.蛋白质免疫印迹法检测Bcl2, Bax和Caspase3的表达变化也与TUNEL染色结果一致. mi R-19b mimics可下调PTEN,激活Akt,而miR-19b inhibitor的作用则相反.同时转染miR-19b inhibitor和PTEN-siRNA进行功能逆转实验,发现PTEN-siRNA可以逆转miR-19b inhibitor对细胞凋亡的促进作用.[结论]miR-19b可通过下调PTEN激活Akt信号通路,保护心肌细胞凋亡.     

利用非损伤法分析鳄蜥粪便激素水平的变化

利用粪便样品检测性腺类固醇激素代谢水平在很多物种中已得到有效应用,但是在爬行动物中相应的研究还较少。2011年5-10月对广东罗坑自然保护区的10只(5雄5雌)鳄蜥进行粪便采样,采用乙醇加热法提取粪便中类固醇激素,并采用酶联免疫法成功检测鳄蜥粪便中雌二醇、睾酮和孕酮的浓度。研究结果显示:雄性个体睾酮水平在6月份有明显升高,提示6月份可能是鳄蜥的主要发情期;在进入冬眠前的10月份,鳄蜥怀孕个体的孕酮水平明显升高,与5月份的孕酮水平差异显著(LSD:P<0.05);雌性怀孕和非怀孕个体雌二醇水平无季节性变化,因此认为雌二醇有可能在鳄蜥繁殖周期中并不起重要作用。     

c-fos和CYP17对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞雄激素分泌过多的影响及机制

 为研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞中c-fos 及CYP17 基因表达的变化,探讨c-fos 及CYP17 基因对PCOS 卵巢颗粒细胞雄激素分泌的影响及可能的作用机制,对拟行IVF/ICSI-ET 的PCOS 患者及非PCOS 患者分为对照组(非PCOS 患者)和PCOS 组(PCOS 患者),两组患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h,利用放射免疫法检测细胞上清液中的雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)的水平;利用2-NBDG 标记葡萄糖检测颗粒细胞的葡萄糖摄取能力;采用免疫蛋白印迹(WesternBlot)法分别评估颗粒细胞中c-fos 及CYP17 基因的表达变化。结果发现,PCOS 组患者与对照组患者相比,颗粒细胞培养上清液中睾酮水平升高(P<0.05)、孕酮水平降低(P<0.05)、雌二醇水平无明显变化(P>0.05),且颗粒细胞对2-NBDG 标记葡萄糖摄取明显降低(P<0.05),提示PCOS 患者卵巢颗粒细胞雄激素分泌异常增高,并存在糖代谢异常。与对照组患者相比,PCOS组患者颗粒细胞CYP17 基因表达升高(P<0.05),c-fos 基因表达降低(P<0.05),提示颗粒细胞c-fos 基因异常低表达,可能降低了对CYP17 基因的抑制作用,使CYP17 高表达,可能是卵巢颗粒细胞雄激素分泌增加的原因之一。     

MIR-187影响胃癌细胞恶性生物学行为的研究

探讨mir-187对胃癌细胞恶性生物学行为的影响;采用q PCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞、MKN45细胞和人永生化胃黏膜上皮细胞GES细胞中的表达,应用miR-187 mimics转染SGC7901细胞和MKN45细胞,通过MTT实验、流式细胞术和裸鼠成瘤实验检测miR-187对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。结果 SGC7901、MKN45细胞中miR-187的表达明显高于GES细胞;与对照细胞相比,MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌SGC7901细胞的增殖增快(P0.05),流式细胞检测表明miR-187mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P0.05),裸鼠成瘤实验提示转染miR-187mimics可以促进SGC7901细胞成瘤(P0.05)。说明miR-187可以促进胃癌细胞生长、抑制凋亡和促进增殖,提示miR-187在胃癌恶性生物学行为中发挥重要作用,有可能成为诊断胃癌的新标志和治疗胃癌的新靶点。     

雌性中缅树鼩不同生理期血液激素和脂类指标分析

为了阐明雌性中缅树鼩不同生理期血液激素和脂类指标的变化,对其雌二醇(Tradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)、睾酮(Testosterone,T)、甲状腺激素(Thyroxine,T_4)、三碘甲状腺原氨酸(3,3'5-triiodothyromine,T_3)、瘦素、皮质醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、乳酸脱氢酶、总胆汁酸、尿酸和总蛋白含量进行了测定。结果表明:较野外种群,实验室驯化种群和繁殖种群血清中雌二醇、孕酮显著降低;而血清中高密度脂蛋白胆固醇、总胆汁酸、乳酸脱氢酶、尿酸含量显著升高;怀孕期血清中睾酮、总蛋白显著降低,雌二醇、孕酮、T_3、T_4、瘦素、皮质醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆汁酸、乳酸脱氢酶、尿酸含量显著升高;与未发情期相比,发情期雌性中缅树鼩血液中的雌二醇显著升高,孕酮含量极显著升高。以上结果说明长期驯化的中缅树鼩的动情能力降低,长期圈养同时能降低中缅树鼩的新陈代谢能力。     

MicroRNA-25对大鼠骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡调节作用

探讨miR-25对白细胞介素1β(IL-1β)促进OA软骨细胞凋亡和增殖的影响。以木瓜蛋白酶膝关节腔注射诱导骨性关节炎动物模型和SD大鼠骨性关节炎软骨细胞原代培养。IL-1β体外刺激OA软骨细胞,模拟骨性关节炎体外环境。MiR-25mimic或inhibitor转染至OA软骨细胞。利用Annexin V-FITC/PI和CCK-8法检测软骨细胞细胞凋亡和细胞增殖。miR-25过表达明显抑制软骨细胞凋亡而miR-25低表达促进软骨细胞凋亡(P0.05);miR-25 mimic促进软骨细胞增殖,而miR-25 inhibitor抑制软骨细胞增殖(P0.05)。miR-25介导OA发病发生,进展中发挥着保护性调节作用,抑制OA软骨细胞凋亡和促进其增殖作用,可能对OA发病机制有新的认识和提示OA新治疗策略。     

miR-494靶向TLR-4通路在骨质疏松发病中的作用及机制

目的 探究miR-494在骨质疏松大鼠中的表达及其调控机制。方法 选取30只8周龄雌性Sprague-Dawley大鼠,构建骨质疏松大鼠模型。双能X线吸收仪测定骨密度。ELISA检测大鼠血清中骨钙素(BGP)和总碱性磷酸酶(TALP)含量。分类培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)。qRT-PCR检测miR-494和TLR4 mRNA的表达。Western blot检测TLR4蛋白的表达。双荧光素酶报告基因验证miR-494与TLR-4的靶向关系。CCK8实验检测各组BMSCs的增殖能力。茜素红S染色检测各组BMSCs成骨分化情况。油红O染色检测各组BMSCs成脂分化情况。结果 和NC组相比,OP组大鼠骨密度、BGP含量、细胞增殖能力、矿化结节数均显著降低,TALP含量、miR-494和TLR4的表达、脂肪细胞数均显著升高(P<0.05)。和OP组相比,OP+miR-494 inhibitor组大鼠骨密度、BGP含量、细胞增殖能力、矿化结节数均显著升高,TALP含量、miR-494和TLR4的表达、脂肪细胞数均显著降低(P<0.05)。和OP+miR-494 inhibit...     

乳腺癌患者血清miR-29c与miR-200a表达相关性及其机制研究

目的 探究miR-29c与miR-200a表达的相关性及其机制,为乳腺癌早期诊断及预防提供新的分子标志物及治疗靶点.方法 通过荧光定量PCR检测乳腺癌患者miR-29c、miR-200a的表达并分析其相关性;同时将人工合成的miR-29c模拟体转染到乳腺癌细胞MCF-7内,应用实时荧光定量PCR检测两种微小RNA表达量的变化,重亚硫酸氢盐测序法检测miR-29c转染组、阴性对照组、DNA甲基化抑制剂5-Aza-CdR处理组的miR-200a启动子区甲基化水平.结果 实时荧光定量PCR结果显示,乳腺癌患者血清中miR-29c与miR-200a的表达存在正相关关系(r=0.63,P<0.01).与阴性对照组比较,miR-29c模拟体转染组的miR-200a的相对表达量显著增高(P<0.05);重亚硫酸盐测序结果显示,与NC组比较,miR-29c模拟体转染组miR-200a基因的甲基化程度明显降低,与5-Aza-CdR处理组的甲基化水平相近.结论 miR-29c与miR-200a的表达具有相关性,miR-29c通过影响DNA甲基化水平而增加miR-200a的表达.     

miR-221-3p在PTC中的表达及对BCPAP细胞增殖、凋亡的影响与KEGG、GO分析

目的:观察miR-221-3p在乳头状甲状腺癌(PTC)中的表达,分析其与分期、转移的关系,瞬时转染miR-221-3p inhibitor观察其对PTC细胞BCPAP的增殖和凋亡的影响,生物信息学方法分析miR-221-3p可能作用的靶基因、参与的通路及功能.方法:(1)原位杂交法(ISH)检测PTC、滤泡状甲状腺癌(FTC)与正常甲状腺组织中miR-221-3p的表达.(2)miR-221-3p inhibitor瞬时转染BCPAP细胞后与阴性对照组比较,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法、噻唑蓝(MTT)法、Annexin V-FITC/PI流式法分别检测两组细胞miR-221-3p表达、细胞增殖、凋亡情况.(3)软件预测miR-221-3p的靶基因,进行KEGG及GO富集分析.结果:(1)ISH显示PTC组织中miR-221-3p表达明显上调,与FTC、正常甲状腺组织相比差异有统计学意义(P0.01);(2)miR-221-3p inhibitor转染细胞后,细胞miR-221-3p表达下降;细胞增殖减慢,细胞凋亡无明显改变.(3)在PTC中,KEGG分析显示miR-221-3p的靶基因参与了Wnt signaling pathway、Pathways in cancer等通路,GO分析显示miR-221-3p具有细胞代谢调控、基因表达调控、RNA代谢调控等生物功能.结论:miR-221-3p在PTC中表达明显上调,可能成为PTC的一种标志物,可能有影响PTC细胞增殖的作用,参与了Wnt signaling pathway、Pathways in cancer等通路,对PTC细胞的代谢、基因表达等功能具有重要影响.     

miR-132在人脐静脉内皮细胞中的生物学功能

目的:探讨动脉粥样硬化组织中miRNA-132的表达及其对内皮细胞增殖、凋亡及脂代谢的影响.方法:用Real-time PCR法检测48例动脉粥样硬化患者组织与正常动脉组织的表达量;培养人脐静脉内皮细胞,分别转染miR-132 inhibitor及阴性对照,检测细胞的增殖、凋亡;利用Western blot检测相关基因表达变化.结果:抑制miR-132表达,内皮细胞的增殖增强,凋亡减少;增殖相关基因PCNA和KLF5升高及凋亡相关基因表达降低.结论:miR-132抑制HUVEC细胞的增殖,并在体外诱导细胞凋亡,miR-132可能抑制动脉粥样硬化的形成,其抑制功能可能通过下游PCNA和KFLs而实现.     

microRNA-25促进骨关节炎软骨细胞外蛋白多糖和II型胶原蛋白合成作用

探讨miR-25调节骨关节炎软骨细胞外蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白合成作用。用木瓜蛋白酶膝关节腔注射诱导骨性关节炎动物模型和SD大鼠骨性关节炎软骨细胞原代培养。IL-1β体外刺激OA软骨细胞,模拟骨性关节炎体外环境。miR-25mimic或inhibitor转染至OA软骨细胞。利用RT-q PCR和/或蛋白质印迹法分别检测miR-25、ACAN、Col2a1。IL-1β刺激正常软骨细胞、骨性关节炎细胞比无IL-1β刺激对照组中miR-25表达水平显著增高(P0.05)。相比未转染miR-25对照组,miR-25过表达转染组明显促进ACAN和Col2a1 mRNA转录及蛋白质合成(P0.05)。相反,miR-25低表达转染组明显抑制ACAN和Col2a1 mRNA转录作用及蛋白质合成(P0.05)。miR-25介导OA发病发生、进展中发挥着保护性调节作用,抑制蛋白多糖、胶原蛋白降解作用,可能对OA发病机制有新的认识和提示OA新治疗策略。     

miR-34a靶向MMP-13调控大鼠软骨细胞凋亡的机制

目的:探讨调控miR-34a的表达对大鼠软骨细胞凋亡的影响.方法:大鼠关节软骨原代细胞培养,慢病毒转染miR-34a、miR-34a inhibitor分别使大鼠关节软骨细胞miR-34a过表达和抑制表达,另设无关序列对照组,Annexin V/PI双染流式细胞术分析对比各组大鼠软骨细胞凋亡率,通过生物信息学方法预测miR-34a调控软骨细胞凋亡潜在基因靶点,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time-PCR)检测各组软骨细胞miR-34a的表达,检测软骨凋亡相关因子MMP-13、Col2a1的mRNA转录水平;免疫印迹法检测各组的MMP-13、Col2a1、caspase-3的蛋白表达水平.结果:miR-34a过表达后大鼠软骨细胞凋亡增多,抑制miR-34a表达后大鼠软骨细胞凋亡减少,同时miR-34a过表达后caspase-3的表达增高(P0.05),miR-34a过表达后Col2a1在mRNA和蛋白水平表达下降,而MMP-13的表达增加(P0.05).沉默miR-34a的表达后Col2a1在mRNA和蛋白水平表达增加,而MMP-13的表达下降.MMP-13是miR-34a调控大鼠软骨细胞凋亡的潜在靶点.结论:miR-34a的表达调控大鼠软骨细胞凋亡,MMP-13是miR-34a其机制中的潜在靶点.     

免疫初乳对大鼠血液某些生理指标和激素水平的影响

24只健康成年SD大鼠,雌雄对半,随机分成对照组(C组)、普通初乳组(NC组)、免疫初乳组(IC组),每组8只.NC和IC组每天分别灌服普通初乳和免疫初乳(1 mL/100 g体重),C组灌服生理盐水.连续6 d.在第6天观察了灌胃免疫初乳后大鼠血液某些生理指标和激素水平的变化,探讨免疫初乳在参与机体生理活动和内分泌功能活动过程中的作用.结果显示,在整个实验期内,IC组大鼠血液中性粒细胞显著高于C、NC组;NC和IC组大鼠血浆中Ins水平极显著高于对照组;IC组大鼠T3水平显著高于对照组;然而,在整个实验期,大鼠血浆T4、IL-2水平各组间无显著差异.提示免疫初乳可提高正常机体非特异性免疫功能,促进机体代谢激素的分泌,但对细胞免疫没有明显效应.     

地屈孕酮联合来曲唑对子宫内膜异位症患者生育指数的影响

探究地屈孕酮联合来曲唑对子宫内膜异位症患者生育指数的影响。选取于2018年5月-2019年4月在本中心治疗的96例子宫内膜异位症患者,随机分为对照组和联合组,各48例。其中对照组给予来曲唑治疗,联合组在对照组的基础上加用地屈孕酮治疗。对比2组临床疗效,激素水平[促黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)],血清水平[糖类抗原125(CA125)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶3(MMP3)]以及生育指数。治疗后,联合组总有效率91.67%较对照组72.92%显著升高(P0.05);2组LH、FSH、E2、CA125、VEGF、MMP3水平与治疗前相比均明显降低(P0.05),且联合组明显低于对照组(P0.05);2组生育指数较治疗前均明显升高(P0.05),且联合组明显高于对照组(P0.05)。地屈孕酮联合来曲唑治疗子宫内膜异位症效果明显,可有效降低血清激素水平,提高生育指数。     

miR-193b通过负向调控MCT7基因的表达抑制人胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭

为探讨miR-193b对人胶质瘤U251细胞的迁移和侵袭能力的影响,利用HiPerFect转染试剂瞬时转染miR-193b模拟物(mimics)上调U251细胞中miR-193b的表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其转染效率,然后进行细胞划痕实验及侵袭实验,分别检测miR-193b对U251细胞迁移及侵袭能力的影响.结果显示过表达miR-193b可抑制U251细胞迁移和侵袭的能力.应用生物信息学软件预测,提示单羧酸转运蛋白7(MCT7)基因可能是miR-193b的潜在靶基因.进而构建双荧光素酶报告基因系统从转录水平上证明MCT7为miR-193b调控的靶基因;qRT-PCR及蛋白质免疫印记(Western blot)分别在mRNA和蛋白水平上进一步证明MCT7基因的表达受miR-193b的负调控.由此可见,miR-193b很可能通过负向调控MCT7基因的表达来抑制U251细胞的迁移与侵袭.     

miR-429对甲状腺癌细胞增殖迁移侵袭能力的影响

目的 探讨miR-429对甲状腺癌细胞增殖迁移能力的影响及其作用机制.方法 将甲状腺癌细胞分为观察组(anti-miR-429质粒转染)、阴性对照组(miR-429空载体质粒转染)、空白对照组(不进行转染),分别进行CCK-8细胞增殖实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验.RT-PCR法检测miR-429表达水平,...     

皖西白鹅雌鹅生殖激素水平研究

本文研究了皖西白鹅雌鹅几种主要生殖激素在生殖期与非生殖期的变化情况。相关激素测定的结果表明：血清中 垂体泌乳素(PRL)、雌二醇(E_2) 和孕酮(P)含量在生殖期和非生殖期呈现规律性变化。随着雌鹅进入生殖期，雌二醇(E_2) 和孕酮 (P)含量都逐渐升高，特别是在生殖期的后期，二者都出现了峰值，然后随着雌鹅离开生殖期而逐渐下降。而垂体泌乳素(PRL) 在血清中的含量变化情况却与雌二醇(E_2) 和孕酮(P)含量变化情况相反。在生殖后期含量下降，而离开生殖期后，含量反而升 高。     

油橄榄叶提取物和美沙酮对海洛因依赖大鼠血浆性激素及卵巢血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨油橄榄叶提取物(olive leaf extract,OLE)和美沙酮联合应用对海洛因依赖大鼠血浆性激素及卵巢血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:将40只健康大鼠随机分成模型(A)组、OLE治疗(B)组、美沙酮治疗(C)组、OLE+美沙酮治疗(D)组.按递增法采用皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,造模后药物处理30 d,然后分别用药物进行治疗.采用放射免疫分析法检测血浆催乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡生成激素(FSH)和促黄体生成激素(LH).用免疫组织化学法检测卵巢VEGF的表达情况.结果:与A组比较,D组、B组和C组血浆中E2、FSH、P含量显著降低,PRL、LH含量显著升高,卵巢VEGF阳性表达的细胞数量显著下降.其中D组作用显著优于单独治疗组.结论:OLE联合美沙酮对海洛因损害大鼠生殖内分泌后的功能恢复作用优于单独治疗组.     

诱导牦牛同期发情试验

应用生殖激素处理诱导牦牛同期发情 ,结果表明 :LRH -A3 +PMSG和PG -CL +FSH处理的试验母牦牛 96h以内的发情率分别达 83 3 3 %和 73 3 3 %,极显著地高于未处理的对照牛(2 0 0 0 %) (P <0 0 1 ) ,两试验组之间差异不显著 (P >0 0 5 ) ;不同繁殖类型母牦牛外周血浆P4和 1 7β -E2 含量的测定结果 :牙日玛母牦牛外周血浆P4 和 1 7β -E2 的含量略高于青麻和干巴母牦牛 (P >0 0 5 )。     

miR-208b干预对心肌梗死小鼠的保护作用

目的 研究miR-208b对心肌梗死(myocardial infarction, MI)小鼠的保护作用。方法 构建心肌梗死小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组(MI组)、空载体组(Ad组,注射未携带miR-208b antagomir腺病毒)、实验组(miR-208b antagomir组,注射携带miR-208b antagomir腺病毒),另选取未进行前降支结扎的小鼠作为假手术组(Sham组)。使用超声心动检测心功能指标,利用qRT-PCR测定小鼠心肌miR-208b的表达,通过TTC染色测定小鼠心肌梗死面积,借助TUNEL法检测梗死周边区心肌细胞的凋亡情况,通过Western blot检测心肌细胞Bcl-2和Bax的表达水平。结果 小鼠心肌梗死7 d后,与Sham组比较,MI组及Ad组小鼠心肌梗死周围区域miR-208b的表达显著上调(P<0.05),miR-208b antagomir组小鼠miR-208b的表达显著较MI组下调(P<0.05);miR-208b antagomir组心肌梗死面积明显小于MI组(P<0.05);MI组、Ad组、miR-20...