木聚糖降解菌的筛选和木聚糖酶性质的研究

筛选两株生长快、产木聚糖酶活力高的菌种；黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ，ＡＮ０１）、链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｓｔｒ７Ｂ），酶活力分别达１２８ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ和１７６ｍｇ／Ｌ·ｍｉｎ；酶反应最适温度分别为６０℃与５０℃；最适ｐＨ值为５．０和６．０，并分别在ｐＨ２．２～５．０，５．８～６．４酶活性稳定；在６０℃条件下保温１．５ｈ，酶活力分别剩余２０．５％，８８．５％，其中ＡＮ０１株原酶液在９０℃保温１０ｍｉｎ，活力仍剩余１４．５％．Ｃｕ２＋对酶活表现出极强抑制，Ｆｅ２＋，Ｍｇ２＋，Ｃａ２＋等离子则有促进作用；用纸层析法探讨了不同培养时间各种产物产生的情况．     

植酸酶固体发酵高产菌的筛选

经大量菌种初筛和复筛，得到一株在固体发酵产植酸酶较高力株Ｇ２，酶活达２．６千单位Ｇ２菌株特别适合于固体发酵，并对植酸酶固体发酵酶活测定方法进行了探讨。     

产植酸酶青霉菌株的诱变研究

对产植酸酶的青霉菌株Ａ２进行了诱变研究。分别以ＨＮＯ２－ＵＶ和ＵＶ－５Ｂｕ复合处理，进行了二轮诱变筛选后，得到高于Ａ２５０％以上的变异株６株，其中Ａ２－ＵＶ５９－２０株的酶活达０．８１２±０．０１９ｕ／ｍｌ，为出发菌株Ａ２的二倍多。     

K_(123)菌株普鲁兰酶(Pullulanase)的合成及其酶性质的研究

研究了一株从白酒发酵现场分离得到的Ｋ１２３菌株普鲁兰酶的合成及其部分酶性质．结果是Ｋ１２３菌株的异淀粉酶在培养液中的大量积累发生在稳定期后期,菌的最适生长温度为３５℃,产酶的最适温度则为３０℃;菌的最适生长ｐＨ和产酶的最适ｐＨ均在７．０～７．５;产酶的最佳碳源为可溶性淀粉,有效碳源是糯米淀粉、糊精、支链淀粉、玉米面、茁霉多糖、麦芽糖,而葡萄糖则抑制产酶;产酶的最佳氮源是蛋白胨、酪素水解物,无机氮源则使得Ｋ１２３菌株的产酶量略低于有机氮源．通气量对菌体的生长影响较大,但菌体的生长达稳定期后,通气量的改变对菌的产酶影响不大．Ｋ１２３菌株所产的异淀粉酶水解茁霉多糖的产物为麦芽三糖,不水解动物淀粉,是普鲁兰酶（ｐｕｌｕｌａｎａｓｅ）．该酶反应的最适温度为５０℃,最适ｐＨ５．８,受Ｃａ２＋,Ｍｎ２＋等离子激活,受Ｃｕ２＋,Ｚｎ２＋等离子抑制;该酶的热稳定性较差,５０℃以上迅速失活;ｐＨ稳定性较好,中性,微酸性条件下,冰箱中可长期保存．该酶应用于固态白酒发酵可提高出酒率平均４％以上．     

黑曲霉AJ1958菊粉酶的产生和性质

从菊芋根际土壤中分离出一株菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）产生菌，经物理和化学诱变得高酶活黑曲霉突变株ＡＪ１９５８．该菌株在培养基（０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液１０００ｍＬ，豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，ＫＣＩ０．７ｇ，ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０１ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．５ｇ，ＰＨ５．０）中，于３０℃振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ－１．酶水解反应的最适ＰＨ为３．０～４．０，最适温度为６０℃，在ＰＨ２．５～５．５的范围内和７５℃以下较稳定．适宜条件下，１０ｈ内０．０５ｇ／ｍＬ的菊粉溶液中之底物几乎１００％被酶水解．产物糖中果糖质量分数为９３％，葡萄糖质量分数为５．６％．该突变株产生的菊粉酶具有较满意的水解性和热稳定性．     

植酸酶高活性菌株的选育及酶性质的初步研究

以本实验室筛选的一株米曲霉为出发菌株，通过紫外线诱变，并经过初筛、复利筛等步骤得到一株植酸酶高产菌株，酶活约提高１５６％，最高酶活达２４０Ｕ／ｍｌ粗酶液，７２ｈ左右达产酶高峰期。     

克鲁维酵母Y－85菊粉酶的研究

菊粉酶产生菌株─—克鲁维酵母Ｙ－８５在１５Ｌ罐中进行产酶发酵，培养２４ｈ，发酵液中菊粉酶的总活力可达１０３２ｕ／ｍｌ，其中胞壁酶活７６８ｕ／ｍｌ，占总酶活的７４％。用含半胱氨酸的缓冲液提取胞壁酶，酶的回收率达８８％，比活力可达１００８ｕ／ｍｇ．酶作用于菊糖的最适ｐＨ为４．５，最适温度为５０℃，在５０℃以下和ｐＨ４～８稳定，金属离子Ａｇ￣＋、Ｈｇ￣（２＋）对酶有强烈的抑制作用，ＰＣＭＢ对酶也有明显的抑制作用。该酶可水解菊糖，棉子糖和蔗糖等多种底物，能快速将菊芋抽提液中的菊糖水解成果糖，适合用于以菊芋为原料的高果糖浆生产。     

菊粉酶产生菌的选育及发酵条件

野生型黑曲霉ＡＪ１４０５经紫外线、硫酸二乙酯和亚硝基胍等多代诱变处理，获得一株产菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）能力较高的变异菌株ＡＪ１９５８．连续传代１０次，ＡＪ１９５８突变株无衰退，是稳定的变异菌株．其产生的菊粉酶只被菊粉（Ｉｎｕｌｉｎ），而不被蔗糖、淀粉、纤维素、葡萄糖或果糖诱导．在１０００ｍＬ０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液中添加豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，２５０ｍＬ三角瓶中装５０ｍＬ培养液，于３０℃，１２０ｒ／ｍｉｎ旋转式摇床振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ（－１）．Ｋ＋，Ｆｅ（２＋），Ｍｇ（２＋）对酶形成有促进作用．     

胞外植酸酶高产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离、原生质体制备、紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍＬ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定     

产植酸酶菌株的筛选、诱变及酶学性质初探

从富含有机质的环境中采集土样,通过植酸钙平板透明圈法初筛和维生素C-硫酸-钼酸铵-酒石酸锑钾法测定植酸酶酶活复筛,共筛选到5株产植酸酶的霉菌,对这5株菌株进行紫外线和亚硝基胍复合诱变处理,最终获得一株高产植酸酶突变株NTG-506,酶活达到112 U/mL,比原始出发菌株的酶活提高了3.2倍.突变株NTG-506在250mL三角瓶中发酵培养,在装液量60 mL,接种量2%时,培养4 d后酶活达到最高,为124.5 U/mL.植酸酶的最适反应温度35℃,经50℃处理10 min后剩余酶活为原来的57%.     

紫外诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌株的研究Ⅲ.诱变株的选育及其产酶条件的研究

以地衣芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）５３号菌为出发菌株，在原生质形成和再生的最佳条件下制备原生质体，并对原生质体进行了多次诱变处理，从大量突变株进行筛选最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌株５３－Ｇ３８－６，产酶活力由１１０４Ｕ／ｍｌ提高到２２０８０Ｕ／ｍｌ．该诱变株最适产酶条件为：培养基由质量分数（ｗ／％）为胰蛋白胨１，酵母膏０．５，玉米粉５，Ｎａ２ＨＰＯ４１２Ｈ２Ｏ０．４，ＫＨ２ＰＯ４０．０３，Ｎａ２ＣＯ３０．１组成，ｐＨ自然，培养温度４２℃，培养时间４４～４８ｈ，ｗ／％为０．２的ＣａＣＯ３可提高酶的产量．酶作用的最适条件：６２℃，ｐＨ１０．０，ｐＨ在９～１０之间稳定     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．     

胞外植酸酶产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离，原生质体制备，紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍｌ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定。     

生淀粉糖化菌NL—3的发酵条件

以黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ）５２３原生质体为对象,经激光、紫外线和亚硝基胍复合诱变,选育出高产生淀粉糖化酶突变株黑曲霉ＮＬ３,其生淀粉酶活力为１５６Ｕ／ｍｌ．产酶最适培养条件为：起始ｐＨ４５,３０℃,９６ｈ产酶量达最高．Ｋ＋,Ｍｇ２＋对ＮＬ３产生淀粉糖化酶有促进作用;Ｚｎ２＋对产酶有抑制作用．酶的最适作用条件为：以玉米淀粉为底物的最适温度５０℃,最适ｐＨ４５;以甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时最适温度６０℃,最适ｐＨ４０～４５．酶在６０℃保温１５ｍｉｎ,玉米淀粉为底物时酶剩余活力为８０％;甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时酶剩余活力为９８％．     

福寿螺β-葡萄糖苷酶的分离纯化及性质的初步研究

以福寿螺内脏为材料,经本实验室开发的工业生产法制备粗酶粉,进一步采用葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００）和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析纯化,获得经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一纯的β－葡萄糖苷酶制剂．测定该酶的最适反应温度为４３℃,最适反应ｐＨ为５．１;在ｐＨ５．１,４５℃下,该酶催化水杨素水解的Ｋｍ值为３．４０ｍｍｏｌ／Ｌ,活化能为５０．６３ｋＪ／ｍｏｌ．研究几种效应物对酶活力的影响,结果表明：Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋对酶有激活作用,而Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ｐｂ２＋、ＳＤＳ及脲对酶有不同程度的抑制作用,其中Ｃｕ２＋和Ｈｇ２＋对该酶的抑制作用最强,其抑制机理均表现为非竞争性抑制     

豆凝乳酶产生菌的筛选及诱变育种

从１０４份土样中分离到一株产豆凝乳酶的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）,酶活力０．３ｕ／ｍｌ。经ＵＶ－ＤＥＳ诱变及培养基调整后,酶活可达１．６ｕ／ｍｌ以上,其最适产酶培养基组成：麦麸２．５％,（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．５％（ＮＨ４）２ＨＰＯ４ ０．５％,ＣａＣｌ２ ０．０５％。     

长毛对虾碱性磷酸酶性质

从长毛对虾内脏物分离提纯碱性磷酸酶，经快速蛋白液相色谱（ＦＰＩＣ）检验为单一蛋白纯．研究该酶的性质，酶的紫外吸收特征峰在２７８ｎｍ处，荧光激发峰在２８２ｎｍ处，发射光谱特征峰在３４０ｎｍ处．酶的分子量为８２０００道尔顿．酶水解ＰＮＰＰ的最适温度为４７℃、最适ｐＨ为８．２．在３７℃、ｐＨ８．３下，酶的Ｋｍ值为８．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ．Ｍｇ２＋对该酶有激活作用，Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋甲醇、乙醇，乙二醇则表现抑制作用．Ｈｇ２＋的抑制作用表现为反竞争性类型，其抑制常数为９．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

植酸酶高产菌株的选育

从土壤中分离到1株植酸酶高产菌株Pe0,初步鉴定为米曲霉.为了提高植酸酶活力,对Pe0菌株分别进行紫外线和亚硝基胍诱变处理,经初筛、复筛、遗传稳定性能检测,得到1株酶活相对较高、性状相对稳定的菌株Pe2#,酶活稳定在10.66U/mL,较原始菌株提高到3.34倍.另对其发酵条件进行优化,确定最适接种量为4%,最适pH为5.5,最适培养时间为6.5d.在此基础上进行培养基正交优化,结果表明:葡萄糖质量浓度为25g/L,蛋白胨质量浓度为4g/L,(NH4)2SO4质量浓度为2g/L,MgSO4.7H2O质量浓度为0.1g/L时所得菌株产酶活力最高.     

马铃薯酪氨酸酶的部分纯化及理化性质的研究

马铃薯酪氨酸经粗提、丙酮沉淀和酸铵分级后，得到了纯化１．８倍，活力回收４２．５％，比活力为４９．７Ｕ／ｍｇ蛋白的部分纯化酶，并对其理化性质进行了研究。结果表明，以多巴为底物，酶的Ｋｍ为５．７ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ为１６．２μｍｏｌ／Ｌ?ｍｉｎ，最适ＰＨ为８．２，最适温度为４０℃，ＨＳＯ＾－３Ｆ＾－、苯甲酸、叠氮化钠、过氧化氢为其抑制剂，Ｖｃ、苯肼等对该酶的半抑制浓度为μｍｏｌ／Ｌ水平。Ｃｕ＾２＋在低浓     

氮离子注入选育耐酸性α-淀粉酶产生茵诱变效应的研究

利用低能（30keV）氮离子注入中温中性α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌BF7658，研究对其产耐酸性α-淀粉酶的诱变效应结果表明，BF7658菌株存活率曲线是典型的“马鞍型”剂量-效应曲线，在“马鞍型”区域对应注入剂量50×10^14-100×10^14ions／cm^2下具有较高的突变率．通过诱变筛选到一株最适作用pH为5．0，较出发菌株的最适作用pH偏低一个单位的突变株，编号TUST743．该突变株产酸性α-淀粉酶的酶活为343U／mL．该酶在DH4．5和4．0条件下的相对酶活为61％和38％，说明此突变株所产酸性α-淀粉酶对低pH有较好的耐受性．经连续传代实验，表明该菌株遗传性质稳定、