根癌农杆菌介导籼稻93-11遗传转化体系的建立

为建立水稻基因功能研究技术平台并通过生物技术改良优良恢复系,选用93-11成熟胚为外植体,通过优化培养基,建立了适合转化的高效再生系统;首次通过农杆菌介导将大肠杆菌基因C1成功转化93-11,构建了根癌农杆菌介导籼稻93-11遗传转化体系.结果表明,NBA1D3为合适的愈伤诱导培养基,诱导率达87.0%;愈伤经3次继代培养转入分化培养基,分化率为47.0%.获得213株潮霉素抗性植株,随机挑选89株经PCR检测,65株检测到目的条带,阳性植株占73.0%;实时PCR检测C1基因能在转基因植株表达.     

拟南芥胚胎发生基因LEC1对水稻胚胎发育的遗传学效应

从拟南芥的球型胚-心型胚期荚果cDNA中,通过特异引物PCR,克隆到胚胎发生调控基因LECl.将克隆的目的基因构建到植物表达载体pWM101中,将其置于35S启动子下游,并通过PCR和酶切实验验证,获得了在植物中组成型表达LECl的表达载体.提取表达载体质粒,用Nhe Ⅰ酶切质粒,使其成线型,通过花粉管通道法分别转化可育系水稻0099和不育系金23A.转基因的不育系金23A结种子,但胚乳发育缺陷,将胚乳缺陷的种子安于无激素的1/2 MS培养基中培养,其中有一株发芽,长成外观正常的植株,另一株则只长出根.提取其DNA,以特异引物P35S和P2进行检测,为阳性转基因个体.不经授粉,从不育系获得具萌发能力的种子,说明LECl基因在单子叶的农作物水稻中能促进胚胎发生.通过叶片基因组DNA特异引物PCR分子检测,证明从可育系水稻0099也获得阳性转基因植株.     

基因枪法导入cyclAt和GUS基因获得转基因水稻

以cyclAt基因为目的基因,HPT和GUS为选择和报告基因,应用PDS-1 000/He型基因枪协同转导,通过轰击来源于水稻成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织,获得了转基因水稻植株.结果表明:通过X-Gluc染色分析,GUS基因在愈伤组织和再生植株叶片中的表达效率高.以转基因植株的基因组DNA为模板,用cyclAt基因的特异性引物对其进行PCR扩增,只检测到1 000 bp左右的片段,比其1 604 bp的完整序列小,因此推测cyc1At基因在转导入水稻后被剪接.此外,在协同转导过程中,cyc1At和GUS可能与受体基因组DNA随机整合,因此视GUS基因为报告基因有一定局限性;但两者同时被整合的频率远高于单一基因的整合.     

天冬氨酸酶基因工程菌质粒pXZ70的稳定性

将ｐＳＣ１０１质粒上的Ｐａｒ区域（控制质粒分配的基因座）克隆到含有天冬氨酸酶基因的质粒ｐＸＺ７０上，构建成重组质粒ｐＺＺ１，将ｐＺＺ１质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９细胞中，得到一株质粒可稳定遗传的重组子细胞，培养１００代后，含质粒菌数仍在９０％以上。     

苏云金芽胞杆菌高效电转化方法的建立

电转化已经成为苏云金芽胞杆菌工程菌构建过程中非常重要的一种外源基因导入方法.高效率的电转化方法将加速这类研究进展.通过对培养基、培养时间、感受态细胞制备、电转化缓冲液、电压参数的优化,建立一种高效的苏云金杆菌电转化方法.苏云金杆菌生长在含有0.5 mol/L山梨醇的BHI培养基中,30℃振荡培养至OD600值达到0.6～0.8,细菌细胞经1 g/L蛋白酶K在37℃处理20 min,然后用电转化缓冲液洗涤2遍,设定电压为1 800 V,电击1次.利用该方法,pHT315质粒在苏云金杆菌中的转化效率大幅提高.     

杀虫球孢白僵菌菌株筛选及类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆

在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28a( ),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白.     

LL-37/hCAP-18基因克隆及其真核表达载体的构建

LL-37 hCAP-18是一种重要的多功能免疫分子.为探讨hCAP-18在基因治疗中的可行性,应用RT-PCR技术从人白血病细胞系J6-1细胞总RNA中成功扩增出560bp的hCAP-18基因编码区cDNA序列,构建了hCAP-18重组表达质粒phCAP-18.采用脂质体法将质粒phCAP-18瞬时转染COS-7细胞,Westernblot证实,hCAP-18能在COS-7细胞中表达.     

东北红豆杉细胞GGPPS基因cDNA的克隆

牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶是红豆杉细胞紫杉醇生物合成途径中的关键酶。试验采用RT-PCR技术从东北红豆杉中克隆GGPPS基因片段,将GGPPS基因片段与pMD20-Tvector连接,转化E.coli DH5α,对阳性克隆进行序列测定。生物信息学分析结果表明,获得GGPPS基因片段长度为371 bp,与GenBank中收录的GGPPS同源性达到99%。为从内生真菌紫杉醇生物合成途径中克隆关键酶基因和高产紫杉醇基因工程菌株的构建提供了借鉴。     

环球瞭望

<正> 日本农林省所属蚕丝和昆虫农业技术研究所最近宣布,该所科学家利用从蚕体内分离出的一种基因培育出了新型抗病害转基因水稻,并已经在实验室里收获了第2代种子。这家研究所公布的资料表明,利用蚕等昆虫制造的一种肽能抑制植物病原菌的活性,对革兰氏阴性和阳性细菌都有抵抗作用。这种肽的基因结构虽然已被解析,但此前尚没有把它植入植物中去的先例。科学家町井博明等人在研究中成功地把从蚕体中分离出的这种抗菌性肽基因植入了水稻细胞,不仅培育出了对植物病原菌有抵抗性的植株,而且已经在实验室内获得了它第2     

抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选

目的:构建人源噬菌体展示单链抗体(ScFv)库,筛选抗结核杆菌特异性、高亲和力的ScFv.方法:从结核患者的外周血淋巴细胞中,提取RNA并通过RT-PCR扩增出VH和VL基因,并采用SOE-PCR构建ScFv基因,将其克隆入噬粒载pC ANTA B5E中,转化于大肠杆菌TG1,通过辅助噬菌体M13K07援救构建噬菌体单...     

水稻种子萌发期间胚乳水解的电镜观察

本文对杂交水稻威优35,常规稻湘早籼1号,晚粳6647不同萌发时期的胚乳进行了电镜观察。结果表明:杂交水稻在萌发期间淀粉水解速度比常规稻快,表现出明显的生理优势。这一生理优势与杂交水稻幼苗的生长优势一致。     

水稻不育系育性恢复的化学调控研究

１９９２年３月至１９９３年１１月，我们先后在海南和长沙两地，使用多种化学调控剂处理了不同种类的不育系．结果表明：化学复雄剂对光温敏不育系及细胞质雄性不育系均有一定程度的恢复效应，结实率可恢复到０．１％～１０．０％，且在繁殖季节能显著提高光温敏不育系的结实率，提高幅度达４．４％～１８．４％．孤雌生殖诱导剂对所有供试的普通核不育系，细胞质雄性不育系、光温敏核不育系及孤雌生殖后代不育株均能诱导结实，且与化学复雄剂配合施用时，效果更好，继续深入研究不育系育性恢复的机理及调控技术，可望为杂交水稻育种开辟一条崭新的途径．     

转美洲拟鲽抗冻蛋白基因(afp)番茄过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性测定

检测了转抗冻蛋白基因番茄Ｄ４代植株在低温条件下过氧化物酶（ＰＯＸ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活性．实验显示：转ａｆｐ基因番茄植株在苗期低温锻炼中,三种酶活性均明显高于对照未转基因植株,表明转基因植株在生理生化水平上获得了有益的变异,且抗寒性增强．     

水稻对硒的生物富集分布

以常规早稻为样本,采用盆栽、亚硒酸钠供硒,原子吸收光度法检测．研究了水稻对硒的生物富集分布,结果显示：水稻对硒有一定的富集和较高的有机转化能力,水稻从土壤环境中吸收富集的硒大部分被转化成有机态,积累分布于全株,成熟时各器官中硒的分布依次为：根＞剑叶＞茎＞叶片＞（不含剑叶）＞叶鞘＞穗;水溶性生物大分子中硒的分布为：蛋白质＞核酸＞多糖;硒在蛋白质组分中的分布为：谷蛋白＞球蛋白＞清蛋白＞醇溶蛋白．说明植物所吸收的硒旺盛的参与了其新陈代谢     

LBM2eHBc＋融合基因植物表达载体构建及对番茄的转化研究

禽流感病毒一直是家禽和家畜健康养殖的巨大威胁,甚至威胁着人类的健康,人们也一直在研究各种形式的疫苗来应对禽流感病毒的威胁.番茄作为生物反应器应用于动物疫苗生产具有独特的优点,本研究优化了番茄子叶的再生体系,同时构建了LBM2eHBc＋融合基因的植物表达载体并对番茄进行了遗传转化.结果表明在玉米素（Zt）浓度为0.5 mg/L时番茄子叶外植体的芽再生率达到93.33%;测序结果证明植物表达载体pBI121-LBM2eHBc＋构建成功;利用农杆菌介导的转化方法获得再生抗性苗34株,经PCR检测,阳性率为75.0%,本研究结果为进一步开发禽流感口服疫苗奠定了基础.     

人源抗菌肽LL-37在烟草中的表达

为探讨用植物生物反应器生产LL-37的可行性,利用DNA重组技术将LL-37与植物病程相关蛋白信号肽基因融合,经测序证实序列和阅读框正确后,连接到质粒pBin438上,构建含LL-37 cDNA植物分泌型表达载体pBin/LL-37.通过根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacience)介叶盘法转化烟草(Nicotiana tobacum.NC-89).用PCR和Western blot对转化植株进行分子鉴定.80%转基因植株表达重组LL-37多肽.T0代转基因烟草的蛋白粗提物有抑制Staphylococcus aureus和Escherichia coli生长的活性.LL-37基因在转基因烟草中成功表达,提示用植物表达系统生产活性LL-37蛋白是可行的.     

含ipt基因的根癌农杆菌转化大豆萌动种胚的研究──Ⅲ苗期形态特征分析

将含有３５ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ基因－Ｎｏｓ基因的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４,做为供体．以大豆萌动种胚为受体,用菌液浸染法转化大豆品种黑农３６．对转化植株及对照植株苗期在发芽率、株高、叶子、致瘤等形态特征进行观察．发现转基因植株与对照植株有明显差异．转化植株生长状况明显弱于对照植株．植株矮小、叶子畸形生长,根致瘤率低．间接验证了外源ＤＮＡ的导入．说明苗期形态学分析可做为转基因植株早期筛选的方法之一．     

含ipt基因根癌农杆菌转化大豆萌动种胚的同工酶分析

本实验以 大豆萌动种胚为受体，用含有ＣａＭＶ３５ｓ启动子－Ｇｕｓ基因－ｉｐｔ-基因－Ｎｏｓ基因的融合基因根癌农杆菌ＬＢＡ４４０进行转化，通过对转化及对照植物株苗期根的过氧化笺酶同工酶及酯酶同工酶分析，结果表明酶谱有明显差异。