| Taq DNA聚合酶的分子改造及其在探针法qPCR直扩体系中的应用 |
| |
| 作者姓名： | 胡松青 袁家惠 刘光毅 等 |
| |
| 作者单位： | 1.华南理工大学 食品科学与工程学院, 广东 广州 5106402.广州英赞生物科技有限公司, 广东 广州 5105553.华南理工大学 轻工科学与工程学院, 广东 广州 510640 |
| |
| 基金项目： | 广东省基础与应用基础研究基金资助项目(2021A1515220141) |
| |
| 摘 要： | Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DNA结合蛋白Sso7d或Sto7d融合在野生型Taq DNA聚合酶的N端或C端,构建了4个均可溶表达的改造体,再经过耐受性测试筛选较优的改造体,结果显示：改造体Taq-Sto的耐受性最高,其热稳定性不受影响,且在1 s/kbp的延伸条件下能成功扩增靶标,表明Taq-Sto具有增强的延伸性能,在TaqMan探针法qPCR体系中对腐殖酸、单宁酸、全血等抑制剂同样表现出良好的耐受性。EMSA实验发现：Taq-Sto对DNA模板的结合亲和力有所提高,有利于增强Taq-Sto对模板的竞争力;将Taq-Sto应用于非洲猪瘟病毒（ASFV）的TaqMan探针法qPCR检测,与商品化试剂相比,Taq-Sto具有更低的ASFV检出限,且在体积分数为2%~6%的猪粪便样本或猪肉样本中的检测灵敏度分别为100.0%和85.4%,说明Taq-Sto在直扩qPCR检测领域更具有优势。
|
| 关 键 词： | Taq DNA聚合酶 双链DNA结合蛋白 耐受性 聚合酶链式反应 |
| 收稿时间： | 2023-03-06 |
|
| 点击此处可从《华南理工大学学报(自然科学版)》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《华南理工大学学报(自然科学版)》下载全文 |
|
