| 程序性细胞死亡配体1胞外区原核重组表达、纯化及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 薛德明,梁永波,常秋霜,翟晋豫,张东辉,柴素真,齐华.程序性细胞死亡配体1胞外区原核重组表达、纯化及其多克隆抗体制备[J].河南师范大学学报(自然科学版),2020,48(5):99-104. |
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| 作者姓名： | 薛德明 梁永波 常秋霜 翟晋豫 张东辉 柴素真 齐华 |
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| 作者单位： | 河南师范大学生命科学学院,河南新乡453007;河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008,河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008,河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008,河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008,河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008,河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008,河南赛诺特生物技术有限公司河南省肿瘤病理诊断试剂工程技术研究中心,郑州450008 |
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| 基金项目： | 郑州市重大科技创新专项项目;河南省国际科技合作项目;国家科技重大专项 |
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| 摘 要： | 为制备程序性细胞死亡配体1胞外区多肽及其鼠源性多克隆抗体,根据UniProtKB数据库中公布的其胞外区基因序列(标识符:Q9NZQ7-1)和原核表达载体pET-28a(+)Nde I上游和Xho I位点下游的序列,设计合成带有同源臂的特异性引物.以合成的PD-L1胞外区基因为模板,PCR扩增程序性细胞死亡配体1胞外区基因并将其克隆至pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)-PD-L1-E,转化至大肠杆菌DH5α中,扩增并提取其质粒,然后将质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达.亲和层析镍柱纯化重组蛋白后,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,确认表达蛋白正确.浓缩换液后用重组蛋白免疫Balb/c品系小鼠制备多克隆抗体,经ELISA检测,成功获得抗程序性细胞死亡配体1胞外区血清.该研究对于研发某些肿瘤伴随诊断检测试剂有重要意义.
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| 关 键 词： | 程序性细胞死亡配体1胞外区 原核表达 多克隆抗体 |
Prokaryotic recombiant expression,purification and polyclonal antibody preparation of extracellular domain of programmed cell death 1 ligand 1 |
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| Xue Deming,Liang Yongbo,Chang Qiushuang,Zhai Jinyu,Zhang Donghui,Chai Suzhen,Qi Hua.Prokaryotic recombiant expression,purification and polyclonal antibody preparation of extracellular domain of programmed cell death 1 ligand 1[J].Journal of Henan Normal University(Natural Science),2020,48(5):99-104. |
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| Authors: | Xue Deming Liang Yongbo Chang Qiushuang Zhai Jinyu Zhang Donghui Chai Suzhen Qi Hua |
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