| 一种改进的小非编码RNA cDNA文库构建方法 |
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| 引用本文： | 杜光石,罗发涛,肖燕,陈红军,吴传芳.一种改进的小非编码RNA cDNA文库构建方法[J].四川大学学报(自然科学版),2017,54(3):653-657. |
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| 作者姓名： | 杜光石 罗发涛 肖燕 陈红军 吴传芳 |
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| 作者单位： | 生命科学学院,四川大学生命科学学院,四川大学生命科学学院,四川大学生命科学学院,四川大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 (31371325) |
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| 摘 要： | 本文使用RNA Antisense Purification(RAP)技术富集纯化sncRNA,有效去除了5S、5.8SrRNA.联合使用Tobacco Acid Pyrophosphatase(TAP)和RNA 5′Polyphosphatase处理sncRNA,将5′-端为非单磷酸结构的sncRNA转变成单磷酸结构,增加了文库覆盖率.在sncRNA3′-端添加poly(A)尾结构以及使用oligo(dT)16VN-adapter锚定引物进行逆转录,间接解决了sncRNA 3′-端接头定向连接问题,不再使用价格昂贵的腺苷化接头.改进后的sncRNA cDNA文库容量为3×105cfu,重组率为95%,且测序结果显示,获得的cDNA序列具有较好的完整性.使用这种成本低且行之有效的改进方法,为深入研究sncRNA奠定了基础.
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| 关 键 词： | sncRNA cDNA文库 poly(A) RNA反义链纯化（RAP） |
| 收稿时间： | 2016/3/15 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/5/26 0:00:00 |
An improved method of sncRNA cDNA library construction |
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| DU Guang-Shi,LUO Fa-Tao,XIAO Yan,CHEN Hong-Jun and WU Chuan-Fang.An improved method of sncRNA cDNA library construction[J].Journal of Sichuan University (Natural Science Edition),2017,54(3):653-657. |
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| Authors: | DU Guang-Shi LUO Fa-Tao XIAO Yan CHEN Hong-Jun and WU Chuan-Fang |
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| Institution: | Department of Functional Genome, College of Life Science, Sichuan University,Department of Functional Genome, College of Life Science, Sichuan University,Department of Functional Genome, College of Life Science, Sichuan University,Department of Functional Genome, College of Life Science, Sichuan University and Department of Functional Genome, College of Life Science, Sichuan University |
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