| xyl-d二型乙醇脱氢酶(SADH)G198R突变体的研究 |
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| 引用本文： | 韩俊,刘志斌,马诗淳,杨毅.xyl-d二型乙醇脱氢酶(SADH)G198R突变体的研究[J].四川大学学报(自然科学版),2015,52(1):187-192. |
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| 作者姓名： | 韩俊 刘志斌 马诗淳 杨毅 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都,610064 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No. 31171586); 国家863计划（2012AA022204） |
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| 摘 要： | 本研究通过设计简并引物及文献参考,PCR 克隆得到嗜热厌氧菌菌株 xyl-d 的SADH,并利用定点诱变技术将该酶的198位苷氨酸(Gly)突变为精氨酸(Arg)。将野生型和突变基因连接到原核表达载体pET28a,IPTG诱导表达,再经镍柱纯化,然后比较了两个蛋白分别以 NAD/NADH,NADP/NADPH 为辅因子、异丙醇或异丁醛为底物、55℃条件下的酶活。发现突变后蛋白的总体催化活性相对于野生型有所下降,其中突变蛋白对 NAD/NADH 的亲和性分别下降了约8倍和6倍,而且对NADPH 的亲和性下降也非常明显,但对NADP的亲和性变化却不大。
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| 关 键 词： | SADH PCR定点诱变技术 xyl-d |
| 收稿时间： | 9/4/2013 12:00:00 AM |
The study onxyl-d second alcohol dehydrogenase (SADH) G198R mutant |
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| HAN Jun,LIU Zhi-Bin,MA Shi-Chun and YANG Yi.The study onxyl-d second alcohol dehydrogenase (SADH) G198R mutant[J].Journal of Sichuan University (Natural Science Edition),2015,52(1):187-192. |
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| Authors: | HAN Jun LIU Zhi-Bin MA Shi-Chun and YANG Yi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Second alcohol dehydrogenase PCR site directed mutagenesis techniques xyl-d |
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