| 基于Cre-LoxP系统的新型慢病毒表达载体pLOX-CMV-E/P的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 高文勇,夏景波,陈卓莹,吴彩红,王健欢,龙颖妍,齐绪峰.基于Cre-LoxP系统的新型慢病毒表达载体pLOX-CMV-E/P的构建与鉴定[J].暨南大学学报,2015(2). |
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| 作者姓名： | 高文勇 夏景波 陈卓莹 吴彩红 王健欢 龙颖妍 齐绪峰 |
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| 作者单位： | 1. 武汉市汉口医院 神经内科,湖北 武汉,430012
2. 暨南大学 再生医学教育部重点实验室，广东 广州 510632; 暨南大学 生命科学技术学院 发育与再生生物学系，广东 广州 510632 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(81270183，81100079，81211140351)；广东省自然科学基金项目(S2013010013598)；教育部留学回国人员科研启动基金项目(2013-693)；中央高校基本科研业务费专项资金项目(11614601)；广州市珠江科技新星专项(2014J2200002)． |
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| 摘 要： | 目的:基于Cre-Lox P系统构建携带EGFP及Puromycin抗性基因,并带有巨细胞病毒(CMV)及翻译延伸因子1α(EF1α)双启动子的新型慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒载体系统.方法:以已经插入Lox P序列的p LOX-TERT-ires TK慢病毒载体为模板,用Spe I与Kpn I进行双酶切,去除TERT-ires TK片段,然后与人工设计合成的多克隆位点片段连接,构建p LOX-MCS表达载体.同时,以p B513载体为模板扩增EF1α-EGFP-Puro表达框(带有Bam HI及Kpn I酶切位点),然后与经过Bam HI及Kpn I双酶切的p LOX-MCS载体连接,进而构建p LOX-CMV-EF1α-EGFP-Puro(简称p LOX-CMV-E/P)载体.将p LOX-CMV-E/P载体与慢病毒包装载体p CMVR8.74及p MD2.G共转染293T细胞,包装病毒进行报告基因的功能分析.结果:菌落聚合酶链式反应(PCR)、酶切鉴定及测序结果均与预期结果一致,绿色荧光蛋白及抗药性基因均有较好的活性与功能.结论:成功构建了p LOX-MCS及p LOX-CMV-E/P慢病毒表达载体,为基因治疗及基因功能研究提供有效的慢病毒表达系统.
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| 关 键 词： | 慢病毒表达载体 Cre-LoxP 系统 绿色荧光蛋白基因 嘌呤霉素抗性基因 |
Construction and verification of novel lentiviral expression vector pLOX-CMV-E/P based on Cre-LoxP system |
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| GAO Wenyong,XIA Jingbo,CHEN Zhuoying,WU Caihong,WANG Jianhuan,LONG Yingyan,QI Xufeng.Construction and verification of novel lentiviral expression vector pLOX-CMV-E/P based on Cre-LoxP system[J].Journal of Jinan University(Natural Science & Medicine Edition),2015(2). |
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| Authors: | GAO Wenyong XIA Jingbo CHEN Zhuoying WU Caihong WANG Jianhuan LONG Yingyan QI Xufeng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Lentiviral expression vector Cre-LoxP system EGFP Puromycin resistance gene |
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