抗转铁蛋白受体单抗可变区基因克隆和序列分析

目的:制备基因工程抗体,减少或消除鼠源性单抗在人体内的免疫原性,保留其对人体抗原配体的高度特异性,发展临床导向诊断和治疗。方法:从体外分泌抗转铁蛋白受体单抗杂交瘤细胞系7579中,对其单抗可变区基因进行克隆和序列分析。利用逆转录PRG技术扩增轻、重链可变区基因,再分别与pGEM-T载体连接、并克隆于JM109受体菌之中。利用荧光染色链终止法测定其序列,采用DNASIS7分析软件和与NIH基因库比较分析。结果:轻、重链可变区分别由139和128氨基酸残基组成,包括信号作、互补决定区和骨架氨基酸残基等功能序列。分别属于鼠免疫球蛋白重连Ⅱc和k链Ⅵ家族。结论:来自单抗的可变区的基因是完整的和具有潜在功能性的,为体外获得抗转铁蛋白受体基因工程抗体奠定了基础。