| 海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定 |
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| 引用本文： | 尹世金,兰珍,李羽欣.海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定[J].中南民族大学学报(自然科学版),2013,32(2):36-40. |
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| 作者姓名： | 尹世金 兰珍 李羽欣 |
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| 作者单位： | 中南民族大学生物医学工程学院，武汉430074 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目( 30900239) ; 广东省产学研资助项目( 2010B090400047) |
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| 摘 要： | 为表达钾离子通道阻断剂Im58,设计了4条搭桥PCR引物,通过overlap PCR的方法扩增出蝎毒肽Im58DNA全长片段,选用表达载体pGEX-4T-1,将测序正确的克隆转化至大肠杆菌E.coli/Rosetta(DE3)中.通过检测不同诱导时间和IPTG浓度下融合蛋白的表达量,筛选出最优表达条件.表达蛋白经IPTG诱导后,融合蛋白再经GSH亲和层析柱纯化,将洗脱液经超滤浓缩脱盐、纯化后得GST-Im58融合蛋白,蛋白用小肠激酶酶切后通过RP-HPLC C18柱分离获得色谱纯的蝎毒肽.蝎毒肽通过Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定重组多肽的分子量大小和纯度,并由MALDI-TOF-MS来精确测定重组多肽的分子量.结果表明:Im58阳性克隆子证明成功构建了Im58原核表达载体,Tricine系统的SDS-PAGE蛋白质电泳和MALDI-TOF-MS鉴定Im58多肽表达纯化成功.
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| 关 键 词： | 钾离子通道阻断剂 Im58 原核表达 蛋白纯化 |
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