| 抗菌肽AP-57的原核表达与纯化 |
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| 引用本文： | 马先君,杨梅佳,仝爱平.抗菌肽AP-57的原核表达与纯化[J].科学技术与工程,2016,16(23). |
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| 作者姓名： | 马先君 杨梅佳 仝爱平 |
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| 作者单位： | 四川大学国家重点实验室,四川大学国家重点实验室,四川大学国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（项目编号： 31471286） |
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| 摘 要： | 构建AP-57/C10orf99 重组表达载体,并在BL21中进行重组蛋白的表达,经纯化获得高纯度的AP-57,从而为其功能性研究提供基础。通过合成AP-57基因序列,连接入pET32质粒中与Trx标签和His标签融合,转化进DH5α,经筛选、鉴定为阳性克隆菌落中提取的粒转入基因工程化BL21中进行表达。通过优化表达条件如温度、诱导时间和诱导剂(IPTG)浓度来提高重组蛋白表达量；最后,通过亲和层析浓缩获得融合蛋白,去标签和阳离子交换层析、脱盐步骤获得纯的AP-57蛋白。结果是成功构建了AP-57的诱导表达和纯化体系：当菌液OD为0.6-0.8时,用0.5 mmol/LIPTG,25℃,诱导培养6 h；通过纯化后获得的样品经质谱和SDS-PAGE鉴定为AP-57且含一个链内二硫键。本实验建立了一条完整的AP-57制备工艺,为后续其功能性研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | AP-57/C10orf99 原核表达 蛋白纯化 |
| 收稿时间： | 2016/3/21 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/8/10 0:00:00 |
Expression and purification of antimicrobial peptides AP-57 |
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