3-酮基嘌呤还原酶(TSC10)基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达 |
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引用本文: | 郑丽娜,刘美辰,王思明,白雪媛,赵雨,赵大庆,王佳雯.3-酮基嘌呤还原酶(TSC10)基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达[J].科学技术与工程,2018(10). |
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作者姓名: | 郑丽娜 刘美辰 王思明 白雪媛 赵雨 赵大庆 王佳雯 |
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作者单位: | 长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心 |
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摘 要: | TSC10基因所编码的3-酮基嘌呤还原酶是酵母中神经酰胺合成的重要因子。设计了一种从酵母中提取神经酰胺经济、便捷、高效的方法:(1)利用构建含有TSC10基因的毕赤酵母GS115表达载体p PIC3.5K-TSC10;(2)电转化法将该表达质粒转化到GS115感受态细胞中;(3)用G418筛选以及PCR鉴定;(4)使用qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测。结果经过G418筛选以及PCR鉴定后确定获得了包含TSC10基因的毕赤酵母转化子,经过qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测后发现TSC10基因在20个阳性菌株中均可以稳定、高效表达。成功构建了3-酮基嘌呤还原酶高表达的毕赤酵母菌株,并为后续获得高收率神经酰胺奠定了基础。
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