| 汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在毕赤酵母GS115中的表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 李璞媛,白文涛,张芳琳,吴兴安,胡刚,刘艳丽,王海涛,张伟,徐志凯.汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在毕赤酵母GS115中的表达及鉴定[J].科学技术与工程,2007,7(8):1577-1581. |
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| 作者姓名： | 李璞媛 白文涛 张芳琳 吴兴安 胡刚 刘艳丽 王海涛 张伟 徐志凯 |
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| 作者单位： | 第四军医大学微生物学教研室,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30170048,30470090)，军队“十一五”计划面上项目(06M255)资助 |
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| 摘 要： | 构建了编码汉坦病毒囊膜糖蛋白G2基因的重组质粒,在毕赤酵母中表达,为汉坦病毒基因工程疫苗的研究提供实验基础。利用PCR法从含汉滩病毒76-118株M基因的M56质粒中扩增编码糖蛋白G2的基因片段,克隆入酵母分泌表达载体pPICZαA,构建重组质粒pPICZαA-G2。酶切鉴定挑取的阳性克隆,转化入GS115工程菌,在含100μg/mLZeocin的YPD培养基上筛选。挑选单菌落,PCR鉴定阳性克隆,用0.5%甲醇诱导表达,并利用SDS-PAGE及Western-Blot鉴定表达产物。序列分析表明所获得的基因片段与编码汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G2的基因一致;100μg/mLZeocinYPD培养基上筛选出含pPICZαA-G2转化子,PCR鉴定为阳性克隆;SDS-PAGE可见约70kDa处有目的蛋白表达条带,经Western-Blot证实该条带为汉滩病毒囊膜糖蛋白G2。成功地构建了重组酵母表达载体pPICZαA-G2,并在毕赤酵母中初步表达成功,为今后汉坦病毒囊膜糖蛋白G2表达纯化以及基因工程疫苗的制备奠定了一定基础。
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| 关 键 词： | 汉坦病毒 囊膜糖蛋白G2 毕赤酵母表达系统 蛋白表达 |
| 文章编号： | 1671-1819(2007)08-1577-05 |
| 收稿时间： | 2006-11-28 |
| 修稿时间： | 2006年11月28 |
Expression and Purification of the Glycoprotein G2 of Hantaan virus in Pichia Expression System |
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| LI Pu-yuan,BAI Wen-tao,ZHANG Fang-lin,WU Xing''an,HU Gang,LIU Yan-li,WANG Hai-tao,ZHANG Wei,XU Zhi-kai.Expression and Purification of the Glycoprotein G2 of Hantaan virus in Pichia Expression System[J].Science Technology and Engineering,2007,7(8):1577-1581. |
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| Authors: | LI Pu-yuan BAI Wen-tao ZHANG Fang-lin WU Xing'an HU Gang LIU Yan-li WANG Hai-tao ZHANG Wei XU Zhi-kai |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hantaan virus glycoprotein G2 Pichia expression system epression |
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