| 小鼠Sirt3基因过表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定 |
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| 引用本文： | 孙钦儒,贾 宁.小鼠Sirt3基因过表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定[J].科学技术与工程,2018,18(5). |
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| 作者姓名： | 孙钦儒 贾 宁 |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学部基础医学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（青年项目） |
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| 摘 要： | 构建小鼠Sirt3基因过表达慢病毒载体,检测人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞)感染Sirt3基因过表达慢病毒后Sirt3 mRNA和蛋白的表达,为在细胞和动物水平研究Sirt3的作用提供新的途径和工具。利用Genebank检索的小鼠Sirt3基因序列,人工合成法合成小鼠Sirt3基因的c DNA片段,将其克隆至慢病毒载体p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP中,构建慢病毒表达质粒。进行酶切及测序验证后,将慢病毒表达质粒连同辅助包装原件载体质粒共同转染入293T细胞,收集上清,测定病毒滴度。用Sirt3基因过表达慢病毒感染SK-N-SH细胞,即为Sirt3过表达组(Sirt3);用空载体慢病毒感染的SK-N-SH细胞为空载体组(GFP);未感染病毒的SK-N-SH细胞为对照组(CON)。收集细胞后,用Real-time PCR法检测各组细胞Sirt3 mRNA的水平;用Western blotting法检测各组细胞Sirt3蛋白的表达。Sirt3基因过表达慢病毒载体构建成功,病毒滴度为1.0×10~9TU/m L。Sirt3组SK-N-SH细胞的Sirt3 mRNA和Sirt3蛋白水平均显著高于GFP组和CON组(P0.01)。成功构建的Sirt3基因过表达慢病毒载体具备高效感染力,能在SK-N-SH细胞高效过表达Sirt3,本研究结果为今后进一步在神经细胞和模型动物中研究Sirt3的作用提供了新的途径和工具。
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| 关 键 词： | Sirt3基因 慢病毒 人神经母细胞瘤细胞 |
| 收稿时间： | 2017/7/18 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/9/5 0:00:00 |
Construction and identification of recombination lentivirus carrying mouse Sirt3 gene |
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| SUN Qin-ru and.Construction and identification of recombination lentivirus carrying mouse Sirt3 gene[J].Science Technology and Engineering,2018,18(5). |
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| Authors: | SUN Qin-ru and |
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| Institution: | Xi''an Jiaotong University Health Science Center, |
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| Keywords: | |
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