| 中华鳖dct基因克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 刘文婷,许鹏,张娜,管越强,张耀红.中华鳖dct基因克隆及表达分析[J].河北大学学报(自然科学版),2019,39(6). |
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| 作者姓名： | 刘文婷 许鹏 张娜 管越强 张耀红 |
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| 作者单位： | 河北大学生命科学学院,河北 保定,071002;河北省药品检验研究院,河北 石家庄,050011;保定水产技术推广站,河北 保定,071051 |
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| 基金项目： | 河北省自然科学基金;河北省现代农业产业技术体系淡水养殖创新团队 |
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| 摘 要： | 为了阐明中华鳖酪氨酸酶家族成员dct基因的结构与表达特征,根据Ensembl数据库的中华鳖dct基因序列设计引物,运用RT-PCR技术进行开放阅读框(opening reading frame,ORF)克隆,并进行生物信息学分析,进而采用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,q-PCR)技术检测正常体色和黄色中华鳖肺、肾脏、裙边和肌肉组织的mRNA表达水平.结果显示中华鳖dct基因ORF区全长1 578 bp,编码525个氨基酸,2种体色鳖dct基因序列完全一致;氨基酸序列分析得C末端无L-亮氨酸基序;N末端含有1个信号肽结构域;预测蛋白(成熟肽)分子质量为56.449 ku,理论等电点为6.67,不稳定指数为38.71,表明DCT蛋白是酸性稳定蛋白;预测DCT蛋白为亲水性蛋白;含有跨膜结构域、类表皮生长因子结构域、层粘连蛋白型类表皮生长因子结构域和2个铜离子结合结构域.系统发育树分析显示,在dct基因进化过程中,中华鳖与绿海龟和锦龟的亲缘关系较近.q-PCR结果表明:dct基因在同一个体各组织中均有表达,肺组织中相对表达量最高,且极显著高于其他3种组织;黄色中华鳖肺、肾脏和裙边组织dct表达水平与正常体色鳖的相应组织均存在显著性差异.结果表明,中华鳖体色变异与dct基因突变无关,但dct基因表达改变可能对体色变异起了一定的作用.
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| 关 键 词： | 中华鳖 dct基因 克隆 生物信息学 q-PCR |
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