小麦SBEⅡb基因的克隆及其与PDS基因串联VIGS载体的构建 |
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引用本文: | 南富波,李淼淼,王昊龙,韩俊杰,刘伟,李卫华.小麦SBEⅡb基因的克隆及其与PDS基因串联VIGS载体的构建[J].石河子大学学报,2014(1):1-5. |
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作者姓名: | 南富波 李淼淼 王昊龙 韩俊杰 刘伟 李卫华 |
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作者单位: | 石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室,石河子832003 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31160279、31260357) |
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摘 要: | 为探讨以PDS基因为指示基因利用VIGS技术研究小麦SBEⅡb基因的功能,本研究拟构建小麦SBEⅡb和PDS的双基因串联VIGS重组载体。根据GeneBank中公布的小麦SBEⅡb(AY740401.1)和PDS(FJ517553.1)基因序列分别设计搭桥引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡb和PDS基因的特异片段,利用SOE-PCR技术获得双基因融合片段SBEⅡb:PDS。然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接,用SBEⅡb:PDS基因片段将原载体中的PDS基因片段进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体。结果显示克隆的SBEⅡb和PDS基因片段长分别是181和190 bp,SBEⅡb:PDS片段长是370 bp。序列分析表明:SBEⅡb基因片段与小麦SBEⅡb(AY740401.1)序列同源性为97%;小麦PDS基因片段与PDS(AF155217.2)序列同源性也为97%;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体。本研究构建的BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体将在PDS基因的指示下为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡb基因与小麦淀粉合成的关系奠定了基础。
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关 键 词: | 小麦 SBEⅡb PDS VIGS |
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