| 布鲁菌DK63426基因缺失株的构建及生物学特性研究 |
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| 引用本文： | 李明奇,王小凤,郭嘉,赵天艺,刘航,张樊,吴长新,张辉.布鲁菌DK63426基因缺失株的构建及生物学特性研究[J].石河子大学学报,2020,38(1). |
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| 作者姓名： | 李明奇 王小凤 郭嘉 赵天艺 刘航 张樊 吴长新 张辉 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000;石河子大学动物科技学院/动物疾病防控兵团重点实验室,新疆 石河子832000 |
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| 基金项目： | 国际科技合作项目;新疆生产建设兵团人才项目 |
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| 摘 要： | 目的本研究构建了羊布鲁菌16M DK63_426基因缺失株,分析其在细胞内的生存繁殖和致炎能力。方法以羊布鲁菌16M株基因组为模板,利用融合PCR技术将DK63_426基因的上下游同源臂和卡那抗性基因融合,连接到克隆载体上,通过基因重组构建布鲁菌16M DK63_426基因缺失株16MΔDK63_426,观察布鲁菌亲本株16M和16MΔDK63_426的生长变化趋势,建立侵染小鼠巨噬细胞RAW264. 7模型,检测亲本株和缺失株16MΔDK63_426在胞内的生存能力,检测IL-6、TNF-α细胞因子释放量。结果成功构建了16MΔDK63_426;在体外相同培养条件下该缺失株与亲本株生长趋势相似,培养12 h即进入对数生长期,30 h进入平台期; 16MΔDK63_426在浸染RAW264. 7细胞12 h胞内存活率极显著低于亲本株(P0. 01),在浸染8 h时IL-6的分泌量缺失株组均显著低于亲本株(P0. 05),TNF-α的分泌量缺失株组均显著高于亲本株(P0. 05),在侵染12 h时IL-6的分泌量缺失株组均极显著低于亲本株(P0. 01),TNF-α的分泌量缺失株组均极显著高于亲本株(P0. 01)。结论 DK63_426基因的缺失可影响布鲁菌的胞内存活,影响相关炎症因子的表达,为布鲁菌感染机制的研究奠定理论基础。
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| 关 键 词： | 布鲁菌 缺失株 脂多糖 DK63426基因 |
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