| 大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究 |
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| 引用本文： | 王秋颖,李宁,向本琼.大肠杆菌碱性磷酸酶突变体的构建及其结构与功能研究[J].北京师范大学学报(自然科学版),2007,43(6):647-652. |
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| 作者姓名： | 王秋颖 李宁 向本琼 |
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| 作者单位： | 河北旅游职业学院,067000,河北,承德;北京师范大学生命科学学院,100875,北京 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家基础科学人才培养基金 |
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| 摘 要： | 以大肠杆菌碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)高活性突变株(L138PG233S)为亲本,采用重叠延伸PCR的方法进行定点突变,成功获得了氨基酸替换突变体3个,并对它们的酶活性、特性、内源荧光发射峰等与亲本酶进行了比较分析.结果发现:与亲本酶相比,突变体酶的酶活性降低了18%～85%,Vmax值降低,Km增加,内源荧光发射峰λmax增大等.与亲本酶相同,Zn2 ,Mn2 ,Mg2 仍是它们的激活剂,Na3PO4是它们的抑制剂;这些实验结果说明突变体酶活性的降低直接与其构象变化有关,被替换的氨基酸在维持碱性磷酸酶的结构和功能方面具有特定的作用.
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| 关 键 词： | 大肠杆菌碱性磷酸酶 重叠延伸PCR 突变体 特性分析 荧光光谱 |
| 收稿时间： | 2007-03-14 |
| 修稿时间： | 2007年3月14日 |
CONSTRUCTION OF MUTANTS OF ALKALINE PHOSPHATASE AND REASERCH ON THEIR STRUCTURE AND FANCTION IN E.Coli |
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| Wang Qiuying,Li Ning,Xiang Benqiong.CONSTRUCTION OF MUTANTS OF ALKALINE PHOSPHATASE AND REASERCH ON THEIR STRUCTURE AND FANCTION IN E.Coli[J].Journal of Beijing Normal University(Natural Science),2007,43(6):647-652. |
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| Authors: | Wang Qiuying Li Ning Xiang Benqiong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | alkaline phosphatase in E coli Over-lap extension PCR mutant property fluoresence spectrum |
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