| 优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 王颖,黄灿,孙其濛,马立新,严红.优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达[J].湖北大学学报(自然科学版),2018(1). |
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| 作者姓名： | 王颖 黄灿 孙其濛 马立新 严红 |
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| 作者单位： | 湖北大学生命科学学院; |
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| 摘 要： | 拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1 149 bp(base pair).基因克隆入p HBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒p HBM905BDM-opd p,以及多拷贝表达质粒p HBM905BDM-opd p-2C,p HBM905BDM-opd p-3C,p HBM905BDMopd p-4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2 U/m L.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.
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