| 假单胞菌593多铜氧化酶CopA的漆酶活性研究 |
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| 引用本文： | 毛文凌,杨升,王士林,李亚东,王行国.假单胞菌593多铜氧化酶CopA的漆酶活性研究[J].湖北大学学报(自然科学版),2019,41(5). |
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| 作者姓名： | 毛文凌 杨升 王士林 李亚东 王行国 |
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| 作者单位： | 湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062;湖北大学生命科学学院,湖北武汉,430062 |
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| 基金项目： | 农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室开发基金 |
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| 摘 要： | 从假单胞菌593中克隆出多铜氧化酶copA基因,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3) p Lys S过量表达和纯化.纯化的CopA蛋白展示出漆酶活性,针对漆酶的3种底物ABTS、DMP、SGZ,CopA的最适反应pH分别是3. 5、7. 5和7. 5,最适反应温度分别是50℃、50℃和42℃.pH稳定性和热稳定研究发现,在pH 7. 0条件下,CopA比较稳定,在温度大于42℃保存该蛋白,其活性降低较快.二价金属离子影响实验发现,CopA漆酶活性能被二价铜离子显著加强.酶动力学常数实验结果展示,CopA作用于底物ABTS,K_m为0. 281 mmol/L,V_(max)为3. 02×10~(-3)mmol·L~(-1)·min~(-1),k_(cat)为1. 8 s~(-1); CopA作用于底物DMP,K_m为0. 141 mmol/L,V_(max)为4. 54×10~(-3)mmol·L~(-1)·min~(-1),k_(cat)为2. 2 s~(-1); CopA作用于底物SGZ,K_m为0. 025 mmol/L,V_(max)等于0. 7×10~(-3)mmol·L~(-1)·min~(-1),k_(cat)为0. 87 s~(-1).
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| 关 键 词： | 假单胞菌593 细菌漆酶 酶动力学 |
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