温泉来源地芽孢杆菌耐热α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究 |
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引用本文: | 林 云,林 娟,王国增,林梦丹,叶秀云.温泉来源地芽孢杆菌耐热α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究[J].福州大学学报(自然科学版),2018,46(1):143-150. |
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作者姓名: | 林 云 林 娟 王国增 林梦丹 叶秀云 |
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作者单位: | 福州大学 福建省海洋酶工程重点实验室,福州大学 福建省海洋酶工程重点实验室 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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摘 要: | 以Geobacillus sp.WQJ-1基因组DNA为模板,利用PCR扩增获得成熟α-淀粉酶基因amy WQJ,构建重组质粒p ET-28a(+)-amy WQJ,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达.用镍柱亲和层析对粗酶液进行分离纯化,获得相对分子质量约为59 ku的重组酶r Amy WQJ.研究表明,该酶最适pH值为6.0,具有较好pH稳定性,最适温度为70℃;Ca~(2+)能提高该酶的热稳定性;Hg~(2+)、EDTA、SDS、Cr3+、Mn~(2+)、Cu~(2+)和Pb~(2+)对该酶活力具有不同程度的抑制作用,而Co~(2+)、Na+和β-Mercaptoethanol则具有促进作用.以可溶性淀粉为底物,该酶动力学参数Km为6.62 mg·m L-1,vmax为2 197.80μmol·(mg·min)-1;降解最适作用底物木薯淀粉的终产物为寡聚糖.
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关 键 词: | 地芽孢杆菌 α-淀粉酶 克隆 表达 酶学性质 |
收稿时间: | 2016/9/25 0:00:00 |
修稿时间: | 2017/1/14 0:00:00 |
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