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牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定
引用本文:孙自勇,陈均勇,陈新园,汪晶,田鹏鹏,吴盛,刘建宁.牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定[J].南京大学学报(自然科学版),2004,40(1):41-48.
作者姓名:孙自勇  陈均勇  陈新园  汪晶  田鹏鹏  吴盛  刘建宁
作者单位:南京大学分子医学研究所,南京大学分子医学研究所,南京大学分子医学研究所,南京大学分子医学研究所,南京大学分子医学研究所,南京大学分子医学研究所,南京大学分子医学研究所 南京,210093,南京,210093,南京,210093,南京,210093,南京,210093,南京,210093,南京,210093
基金项目:国家重大科技专项"创新药物和中药现代化"(2002AA2Z3451)
摘    要:用RT_PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn_Sepharose亲和层析一步纯化,从每升培养液可获得1.6mgEKLC,其纯度达90%以上.酶反应动力学结果表明,EKLC对小分子底物Gly_Asp_Asp_Asp_Asp_Lys_β_naphthylamide的Km为(753±42)mol/L,kcat为(31.5±3.8)s-1.对硫氧化还原蛋白-脑钠素融合蛋白(Trx_hBNP)的酶解作用显示,当酶与底物重量比大于1∶100时,经37℃保温5h后,超过75%的融合蛋白被裂解.上述结果表明,EKLC能够特异识别并水解Asp_Asp_Asp_Asp_Lys_肽键,是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.

关 键 词:肠激酶  毕赤酵母  分泌表达  纯化  酶切  免疫印迹  丝氨酸蛋白水解酶

Secretory Expression,Purification and Characterization of Bovine Enterokinase Light Chain
Sun Zi Yong,Chen Jun Yong,Chen Xin Yuan,Wang Jing Tian Peng Peng,Wu Sheng,Liu Jian Ning.Secretory Expression,Purification and Characterization of Bovine Enterokinase Light Chain[J].Journal of Nanjing University: Nat Sci Ed,2004,40(1):41-48.
Authors:Sun Zi Yong  Chen Jun Yong  Chen Xin Yuan  Wang Jing Tian Peng Peng  Wu Sheng  Liu Jian Ning
Abstract:
Keywords:enterokinase (EK)  secretory expression  digestion  Western blotting
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录!
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