GST-UCP2-N和GST-UCP2-C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备 |
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引用本文: | 白蕊,郭亚楠,卞桢,刘丹青,曾科.GST-UCP2-N和GST-UCP2-C原核表达载体的构建表达及多克隆抗体的制备[J].南京大学学报(自然科学版),2010(2). |
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作者姓名: | 白蕊 郭亚楠 卞桢 刘丹青 曾科 |
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摘 要: | 以pMD18-T-hucp2为模板,用设计的两对特异性的引物PCR得到hucp2cDNA N端和C端的两断基因片段,然后将其插入到pGEX-5X-1表达载体上,重组质粒在PCR、双酶切、测序鉴定后,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21表达大量融合蛋白GST-UCP2-N(C),经GST亲和层析纯化蛋白.以该蛋白为抗原免疫ucp2基因敲除小鼠,western blot鉴定血清中抗体的反应性.实验证明成功构建了构建pGEX-5X-1-UCP-N(C)重组质粒,表达出了融合蛋白.并获得了抗血清.为进一步获得灵敏性更高,特异性更强的UCP2的抗体打下了基础.
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