| 重组肠激酶催化亚基在毕氏酵母中的高密度发酵、纯化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 姬秋彦,毕研伟,肖红剑,闫玲梅,高丹丹,李智华.重组肠激酶催化亚基在毕氏酵母中的高密度发酵、纯化及活性鉴定[J].云南大学学报(自然科学版),2012(Z2):426-431. |
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| 作者姓名： | 姬秋彦 毕研伟 肖红剑 闫玲梅 高丹丹 李智华 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物研究所 |
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| 基金项目： | 云南省自然科学基金项目(2007C114M) |
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| 摘 要： | 应用RT-PCR和搭桥PCR技术,扩增肠激酶催化亚基的cDNA,测序正确后克隆至酵母分泌型表达质粒p9K中.将重组质粒p9K/EKLC转化至表达宿主pichia pastoris GS115,筛选得到高效表达重组牛肠激酶催化亚基工程菌.经甲醇诱导,目标蛋白肠激酶催化亚基(EKLC)表达并分泌至酵母培养基中.高密度发酵后,经超滤浓缩,采用SP Sepharose F.F一步纯化得到纯度达98%以上的重组目的蛋白,活性达到2.3 U/uL.上述结果表明,本实验成功获得了肠激酶催化亚基,它是一种能将融合蛋白中目标蛋白与载体蛋白裂解释放的有效工具酶.
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| 关 键 词： | 重组肠激酶 分泌表达 高密度发酵 阳离子交换层析 融合蛋白切割 |
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