| H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 朱春玉,孙婷婷,郑方亮,艾海新,朱俊峰,王宁,商玲玲,刘宏生.H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及原核表达[J].辽宁大学学报(自然科学版),2011,38(2):143-148. |
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| 作者姓名： | 朱春玉 孙婷婷 郑方亮 艾海新 朱俊峰 王宁 商玲玲 刘宏生 |
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| 作者单位： | 辽宁大学生命科学院辽宁省高校动物资源与疫病防治重点实验室,辽宁,沈阳,110036 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，病毒学国家重点实验室开放研究基金，辽宁省百千万人才工程项目，辽宁省教育厅重点实验室项目，辽宁大学青年科研基金 |
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| 摘 要： | 克隆、表达和纯化禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为筛选与NS1相互作用的宿主蛋白以及深入研究NS1蛋白的功能打下基础.根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列,设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增AIV NS1基因,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a载体上,经酶切分析及序列测定正确后,鉴定出NS1基因的阳性重组子.阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,通过Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对NS1蛋白进行纯化.结果成功克隆H5N1亚型AIV的NSl基因,其核苷酸序列长度为678 bp,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,表达产物在上清及包涵体中均有表达.经纯化,目的蛋白纯度高达90%,成功表达纯化出28KD的NS1融合蛋白并鉴定其免疫学活性.成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 NS1基因序列,为进一步研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础.
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| 关 键 词： | 禽流感病毒H5N1 NS1蛋白 克隆 原核表达 纯化 |
Cloning and Procaryotic Expression of NS1 Gene of Avian Influenza Virus H5N1 Subtype |
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| ZHU Chun-Yu,SUN Ting-Ting,ZHENG Fang-liang,AI hai-xin,ZHU Jun-feng,WANG Ning,SHANG Ling-ling,LIU Hong-sheng.Cloning and Procaryotic Expression of NS1 Gene of Avian Influenza Virus H5N1 Subtype[J].Journal of Liaoning University(Natural Sciences Edition),2011,38(2):143-148. |
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| Authors: | ZHU Chun-Yu SUN Ting-Ting ZHENG Fang-liang AI hai-xin ZHU Jun-feng WANG Ning SHANG Ling-ling LIU Hong-sheng |
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| Institution: | (Life Science School of Liaoning University,Key Laboratory of Animal Resource and Epidemic Disease Prevention,Shenyang 110036,China) |
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