| CPC酰化酶基因的人工合成与重组表达 |
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| 引用本文： | 安明,于慧敏,罗晖,宋文斯,沈忠耀.CPC酰化酶基因的人工合成与重组表达[J].清华大学学报(自然科学版),2008,48(9). |
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| 作者姓名： | 安明 于慧敏 罗晖 宋文斯 沈忠耀 |
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| 基金项目： | 全国百篇优秀博士学位论文作者专项基金，北京市科技新星计划项目 |
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| 摘 要： | 7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是头孢菌素类抗生素的中间体,在医药工业中具有重要的应用价值.该文通过人工设计、合成并在重组大肠杆菌中表达头孢菌素C(CPC)酰化酶基因来实现7-ACA的一步酶法催化合成.以Pseudomonas sp.SE83菌株的CPC酰化酶蛋白质序列为模板.对CPC酰化酶基因分两段进行了全局优化设计,包括密码子替换、鸟嘌呤和胞嘧啶含量调整以及酶切位点修改等.通过装配聚合酶链式反应方法最终获得了目标基因,并克隆至表达载体pET-28a,成功构建了诱导型重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28-acy.经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,在Luria-Bertani培养基中,新建重组大肠杆菌所表达的可溶CPC酰化酶占菌体总蛋白的75%以上;经优化培养基摇瓶发酵,重组菌的CPC酰化酶酶活高达2 956U/L.采用上述方法获得的CPC酰化酶,在一步酶法合成7-ACA的工业化生产中具有广阔的应用前景.
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| 关 键 词： | 7-氨基头孢烷酸 头孢菌素C酰化酶 重组大肠杆菌 基因合成 装配聚合酶链式反应 高表达 |
Artificial synthesis and expression of the CPC acylase gene in recombinant E.coli |
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| AN Ming,YU Huimin,LUO Hui,SONG Wensi,SHEN Zhongyao.Artificial synthesis and expression of the CPC acylase gene in recombinant E.coli[J].Journal of Tsinghua University(Science and Technology),2008,48(9). |
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| Authors: | AN Ming YU Huimin LUO Hui SONG Wensi SHEN Zhongyao |
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