| 诺卡氏菌腈水合酶突变基因在重组大肠杆菌中的高活性表达 |
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| 引用本文： | 史悦,于慧敏,罗晖,田卓玲,沈忠耀.诺卡氏菌腈水合酶突变基因在重组大肠杆菌中的高活性表达[J].清华大学学报(自然科学版),2007,47(12):2176-2179. |
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| 作者姓名： | 史悦 于慧敏 罗晖 田卓玲 沈忠耀 |
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| 作者单位： | 1. 清华大学化学工程系,北京,100084
2. 北京科技大学环境工程系,北京,100083 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;教育部全国优秀博士学位论文作者专项基金 |
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| 摘 要： | 为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略:在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对α亚基的起始密码子进行定点突变。结果表明:对α亚基的起始密码子进行定点突变的基因策略为最佳方案,突变后的腈水合酶基因在重组E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中表达时,腈水合酶的比酶活(以干菌质量计)提高到51 U/mg。进一步以pET28a为载体,插入突变后的腈水合酶基因,构建重组菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM。对优选菌株进行培养条件和诱导条件的优化,腈水合酶的最高比酶活达到450 U/mg。
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| 关 键 词： | 腈水合酶 重组大肠杆菌 重组毕赤酵母 定点突变 比酶活 |
| 文章编号： | 1000-0054(2007)12-2176-04 |
| 修稿时间： | 2006年9月30日 |
High level expression of a mutated nitrile hydratase gene of Nocardia sp. In recombinant Escherichia coli |
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| SHI Yue,YU Huimin,LUO Hui,TIAN Zhuoling,SHEN Zhongyao.High level expression of a mutated nitrile hydratase gene of Nocardia sp. In recombinant Escherichia coli[J].Journal of Tsinghua University(Science and Technology),2007,47(12):2176-2179. |
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| Authors: | SHI Yue YU Huimin LUO Hui TIAN Zhuoling SHEN Zhongyao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nitrile hydratase(NHase) recombinant E coli recombinant Pichia pastoris site-directed mutagenesis specific activity |
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