短花针茅SSR-PCR反应体系的建立及引物筛选

以采集于我国内蒙古高原、黄土高原和新疆等地的6个短花针茅野生种群为材料,采用正交实验的方法对模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物浓度进行5因素4水平的正交优化设计,依据同源物种紫花针茅的19对SSR引物筛选适用于短花针茅的SSR引物.结果表明:(1)短花针茅最佳SSR-PCR反应体系为(25μL):100ng模板DNA 1μL、2.0mmol/L的Mg2+2.5μL、100μmol/L dNTPs 2μL、2.0U Taq DNA聚合酶0.5μL、0.2μLmol/L上下游引物各1μL,其余用ddH2O补足.(2)建立了重复性和稳定性较好的SSR-PCR扩增程序:94℃预变性3min;94℃变性30s,退火温度与每个引物相对应,退火30s,72℃延伸30s,共30个循环;最后72℃延伸10min;4℃保存,扩增结束.(3)筛选出7对多态性较好的短花针茅SSR引物,同属植物基因组SSR引物的通用率为36.84%.本研究对于进一步探讨短花针茅种群遗传多样性提供参考价值.