| 用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质 |
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| 引用本文： | 陈三凤,管乐,涂然,孙文改,李季伦.用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质[J].科学通报,2005,50(6):540-545. |
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| 作者姓名： | 陈三凤 管乐 涂然 孙文改 李季伦 |
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| 作者单位： | 农业生物技术国家重点实验室;农业部农业微生物资源及其应用重点实验室 |
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| 基金项目： | 本工作为国家自然科学基金(批准号: 30170020)及博士点基金(批准号: 20010019002)资助项目. |
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| 摘 要： | 利用酵母双杂合系统从巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Sp中筛选与NifA有直接相互作用的蛋白质因子. 首先将nifA基因克隆到pGBD-C2载体上, 构建成诱饵质粒pGBD-nifA, 接着将巴西固氮螺菌的染色体DNA构建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3质粒载体上, 形成3个质粒文库YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然后以pGBD-nifA为诱饵, 对YSPC1, YSPC2和YSPC3这3个文库进行了筛选, 得到11个阳性克隆. DNA序列分析表明, 这11个阳性克隆分为4类, 包含4个1~1.3 kb不同的基因片段. 对这4个基因片段进行同源性比较发现, 其中2个编码的蛋白质含有与信号传递有关的PAS结构域, 另外1个基因片段含有与吸收铁有关的fhuE基因, 另一个是未知蛋白. 将这4个基因片段从原来的pGAD载体转移到pGBD载体, 即互换换载体后, 它们仍然与NifA有相互作用; 对这4个基因片段进行移码突变则不再与NifA有相互作用, 说明了它们与NifA相互作用的特异性.
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| 关 键 词： | 巴西固氮螺菌 酵母双杂合系统 PAS结构域 NifA蛋白 |
| 收稿时间： | 2004-10-08 |
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