| Klebsiella oxytoca HP1 adhE基因插入失活法构建产氢重组菌 |
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| 引用本文： | 朱俊波,龙敏南,徐方成,邬小兵,徐惠娟.Klebsiella oxytoca HP1 adhE基因插入失活法构建产氢重组菌[J].科学通报,2007,52(1):55-58. |
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| 作者姓名： | 朱俊波 龙敏南 徐方成 邬小兵 徐惠娟 |
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| 作者单位： | 1. 厦门大学化学化工学院化学工程与生物工程系,厦门,361005
2. 厦门大学生命科学学院,厦门大学生物能源中心,厦门,361005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（批准号：30470395）和福建省重点科技项目（批准号：20051106）资助 |
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| 摘 要： | 乙醇是产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca) HP1厌氧发酵产H2的主要副产物, 每生成1.0 mol的乙醇需要消耗2.0 mol NAD(P)H, 从而降低了H2的产量. 本研究以编码乙醇脱氢酶系(含乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶活性)的adhE基因为改造目标, 利用同源重组技术获得了以提高产氢为目标的K. oxytoca重组菌. 构建工作包括: 根据adhE基因保守序列框克隆K. oxytoca HP1 adhE基因片段, 以质粒pMHE6为模板进行链霉素抗性基因表达盒的扩增, 表达链霉素抗性的aadA基因片段和adhE基因片段分别与载体pMD18-T相连构建重组质粒, 同源整合质粒pTA-Str的构建, 以链霉素作为筛选标记筛选重组菌. 菌落PCR鉴定结果表明, aadA基因表达盒通过质粒pTA-Str的介导已定点插入K. oxytoca HP1基因组中, 成功地构建了adhE基因部分片段缺失的重组菌. 葡萄糖发酵实验结果表明, 相同发酵条件下, 重组菌比野生菌的产氢量提高了16.07%, 乙醇产量下降了70.47%. 利用基因工程技术提高产氢初步获得成功.
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| 关 键 词： | Klebsiella oxytoca HP1 adhE基因 发酵产氢 基因插入失活 |
| 收稿时间： | 2006-10-30 |
| 修稿时间： | 2006-10-302006-12-07 |
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