| Chk1 C 末端调控结构域对其在DNA 损伤后的核定位及修复活性的影响 |
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| 引用本文： | 宁丽峰,王慧萍,散丹,桑建利.Chk1 C 末端调控结构域对其在DNA 损伤后的核定位及修复活性的影响[J].科学通报,2011,56(16):1272-1281. |
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| 作者姓名： | 宁丽峰 王慧萍 散丹 桑建利 |
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| 作者单位： | 北京师范大学生命科学学院细胞增殖及调控生物学教育部重点实验室;国家人口和计划生育委员会科学技术研究所生殖免疫研究室; |
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| 基金项目： | 国家重大科学研究计划(CB914401); 国家高技术研究发展计划(2006AA02Z4A6)资助 |
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| 摘 要： | DNA 损伤效应激酶Chk1 是一种在进化过程中高度保守的蛋白激酶, 它是联系DNA 完整监控器和细胞周期引擎的关键介导蛋白. 通过对一系列GFP 标记的Chk1 调控结构域缺失突变体细胞核定位变化分析, 发现Chk1 C 末端调控结构域中的34 个氨基酸残基(334~368)参与了调控损伤诱导的Chk1 核积累. 同时通过构建Chk1 及不同Chk1 调控结构域缺失突变体的pXJ41 重组质粒, 并与报告质粒pEGFP-N2 共转染HeLa 细胞, 研究不同Chk1 调控结构域缺失突变体的DNA 损伤修复能力, 同时检测了不同Chk1 调控结构域缺失突变体对细胞周期的影响, 并通过Western blot 检测Chk1 下游靶标Cdc25C 的磷酸化情况进行了Chk1 缺失突变体激酶活性分析. 结果显示, C 末端缺失108 个氨基酸残基(368~476)的CΔ368 活性高于全长Chk1,并且其过表达可诱导细胞G1/S 期阻滞, 延迟细胞周期进程. C 末端缺失142 个氨基酸残基(334~476)的CΔ334 活性与全长Chk1 相当, C 末端缺失188 个氨基酸残基(288~476)的CΔ288几乎没有酶活性, 说明调控结构域包括抑制和激活元件. 通过本研究对Chk1 的功能有了新的更为深入的认识.
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| 关 键 词： | Chk1 核积累 结构域 DNA 损伤 修复 细胞周期 |
| 收稿时间： | 2010-12-27 |
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