| 耐辐射球菌DNA修复开关基因pprI缺陷性突变和功能补偿性突变株的建立 |
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| 引用本文： | 高冠军,陆辉明,黄丽芬,华跃进.耐辐射球菌DNA修复开关基因pprI缺陷性突变和功能补偿性突变株的建立[J].科学通报,2005,50(3):232-237. |
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| 作者姓名： | 高冠军 陆辉明 黄丽芬 华跃进 |
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| 作者单位： | 浙江大学原子核农业科学研究所,杭州,310029 |
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| 基金项目： | 本研究为国家重点基础研究发展计划(课题编号:2004CB719604)、国家自然科学基金(批准号:30330020)和国家杰出青年基金(批准号:30425038)资助项目. |
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| 摘 要： | PprI是近来在耐辐射球菌Deinococcus radiodurans中发现的一个极其重要的DNA修复开关基 因. 以已测序的野生型菌株R1为材料, 运用PCR突变法将克隆具有自身GroEL启动子和卡那霉素抗性基因的DNA片段反向重组到pprI基因中去, 首次获得了卡那霉素抗性的、pprI功能完全破坏的突变株YR1. 辐射细胞生存率结果表明, YR1对辐射异常敏感. 另外, 将含有GroEL启动子和卡那霉素抗性基因的DNA片段重组到质粒pRADZ3中, 获得了具有卡那霉素抗性的表达质粒pRADK; 再将体外克隆的具有pprI完整基因和C-末端结构域截短的PprI蛋白基因片段分别重组到pRADK中. 研究结果表明, 含有pprI完整基因的表达质粒在YR1中能够正常表达, 并完全恢复到野生型的极端抗性; 而C-末端结构域截短的PprI蛋白基因片段虽能在YR1中正常表达, 但对辐射异常敏感, 不能恢复其极端抗性. 上述pprI基因功能缺陷性和功能补偿性突变株的建立, 为深入研究细胞体内PprI蛋白质的定位、结构域与功能的关系, 以及原位研究PprI蛋白质的理化特性提供了十分有效的方法
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| 关 键 词： | Deinococcus radiodurans R1 pprI 突变 补偿 功能 |
| 收稿时间： | 2004-12-02 |
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