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| 阴沟肠杆菌B8拮抗活性相关基因的克隆与分析 | |
| 作者姓名： | 余旭平 朱军莉 姚学萍 何世成 黄海宁 陈卫良 李德葆 |
| 作者单位： | 1. 浙江大学动物科学学院,杭州,310029;浙江大学生物技术研究所,杭州,310029 2. 浙江大学动物科学学院,杭州,310029 3. 甘肃农业大学动物科学学院,兰州,730030 4. 浙江大学生物技术研究所,杭州,310029 |
| 基金项目： | 本文工作为国家自然科学基金(批准号:39870034)、国家高技术研究发展计划(批准号:104-04-01-01)和浙江省重大招标课题(批准号:021102529)资助项目. |
| 摘 要： | 为研究具有广谱拮抗活性的阴沟肠杆菌B8的拮抗机理, 应用自杀性质粒pZJ25, 将Tn5转座到B8的染色体上, 筛选到2株拮抗活性丧失的菌株. 选择其中B8F突变株, 应用Tn5上的Kanr基因作为标签, 对Tn5插入位点右侧的拮抗活性相关基因片段进行了克隆, 筛选得到质粒pTLF, 经亚克隆后测序, 获得F片段735 bp的序列. 提取原始菌株B8基因组DNA, 酶切后与PstⅠ接头连接, 应用接头引物和根据F片段设计的特异引物, 在F片段的左右两侧进行染色体步行, 获得了F片段(Tn5插入位点)左侧的1106 bp序列和F片段右侧的664 bp序列. 生物信息学分析显示, 获得的B8菌株拮抗相关基因序列包含3个ORF, 与Pantoea agglomerans的andrimid生物合成基因簇(基因GenBank登录号AY192157)有较高的同源性, 分别对应于admM, admN和admO共3个基因. 被Tn5插入破坏的ORF(命名为anrF基因)对应于admM (Polyketide 合酶基因), 插入位点位于终止密码前214 bp处. 由此证明, anrF基因与B8菌株的拮抗活性相关, 推测B8菌株产生的拮抗物质为andrimid. |
| 关 键 词： | 阴沟肠杆菌B8 拮抗机理 anrF基因 andrimid生物合成基因簇 |
| 收稿时间： | 2004-01-18 |
| 修稿时间： | 2004-05-28 |
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