凝胶阻滞试验分析铜绿假单胞菌LexA蛋白与其靶位点的特异性结合

目的：分析铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，PA）的LexA与其靶位点的特异性结合的特性。方法：以PCR法扩增PA的LexA基因，将其克隆于原核表达载体pET-22b（＋），转化大肠埃希菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白，以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针，用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性。结果：构建了pET22bLexA重组质粒，IPTG诱导目的蛋白表达率约为25％，获得纯度大于95％的目的蛋白；CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合。结论：推定LexA结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合，可能是LexA蛋白的结合靶位点。