自杀质粒同源重组技术敲除阴沟肠杆菌budC基因以提升乙偶姻的产率

为了研究阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae,E.cloacae)SDM的2,3-丁二醇脱氢酶(budC)基因对乙偶姻产生的影响，采用自杀质粒同源重组技术敲除该基因。根据E.cloacae SDM的budC基因序列设计引物，构建budC基因敲除质粒，然后将质粒转化进E.cloacae SDM中，根据表型筛选及PCR验证获得budC基因缺失菌株。进行发酵试验后，利用高效液相色谱检测乙偶姻产量。结果表明，目的基因budC敲除成功，与原始菌株相比，基因缺失菌株2,3-丁二醇的产量降低了76.34%,乙偶姻的产量提高了103.78%。budC基因的敲除阻断了乙偶姻进一步分解代谢产生2,3-丁二醇的途径，提高了乙偶姻的产量。该试验获得了E.cloacaeΔbudC突变株，为利用微生物法工业化生产乙偶姻奠定了基础。