| aroA基因的克隆和优化 |
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| 引用本文： | 何鸣,曾海燕,徐培林,叶长明.aroA基因的克隆和优化[J].中山大学学报(自然科学版),2002,41(2):76-79. |
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| 作者姓名： | 何鸣 曾海燕 徐培林 叶长明 |
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| 作者单位： | 1. 中山大学生物工程中心∥基因工程教育部重点实验室,广东,广州,510275
2. 中山大学地球与环境科学学院,广东,广州,510275 |
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| 基金项目： | 国家 8 6 3资助项目 (2 0 0 1AA2 12 191)，广州市科技局重点攻关项目 (2 0 0 0 -I- 0 13- 0 1) |
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| 摘 要： | 除草剂草甘膦 (glyphosate ,N_phosphonomethylglycine )的靶标酶是由aroA基因编码的EPSP (5_烯醇式丙酮酰莽草酸_3_磷酸 ,5_enolpyruvylshikimate_3_phosphate)合成酶。采用先进的基因优化技术 ,以鼠伤寒沙门氏杆菌和大肠杆菌的EPSP合成酶基因为模板 ,通过随机结合 ,交错延伸的PCR扩增过程 ,克服定点突变的局限性 ,使基因获得多位点突变 ,并使之在大肠杆菌中得到表达。对纯化后的表达产物的酶动力学性质的测定结果表明 ,获得了与作为模板的野生型相比 ,具有高得多的酶活力 (降低的Km (PEP) )和大大增强的草甘膦抗性 (升高的Ki(glyphosate) )的突变基因
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| 关 键 词： | aroA EPSP(5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸)合成酶 草甘膦 |
| 文章编号： | 0529-6579(2002)02-0076-04 |
| 修稿时间： | 2002年1月15日 |
Cloning and Mutagenesis of the aroA Gene |
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| HE Ming ,ZENG Hai-yan ,XU Pei-lin ,YE Chang-ming.Cloning and Mutagenesis of the aroA Gene[J].Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni,2002,41(2):76-79. |
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| Authors: | HE Ming ZENG Hai-yan XU Pei-lin YE Chang-ming |
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| Institution: | HE Ming 1,ZENG Hai-yan 2,XU Pei-lin 1,YE Chang-ming 1 |
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| Abstract: | The herbicide glyphosate inhibits EPSP synthase (5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) encoded by the aroA gene, a key enzyme in the aromatic amino acid biosynthetic pathway in crops and weeds. The staggered PCR extension process has been applied with Escherichia coli and Salmonella typhimurium aroA genes as templates to obtain one variant that exhibits significantly enhanced tolerance to glyphosate. Kinetic patterns of the mutant reveal the successful generation of EPSP synthase glyphosate-tolerant variant with high K i(glyphosate) and low K m(PEP). |
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| Keywords: | aroA 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase glyphosate |
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