单因子和正交设计法建立分枝杆菌多重PCR体系 |
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引用本文: | 周方永,李岩,薄新文,马勋.单因子和正交设计法建立分枝杆菌多重PCR体系[J].石河子大学学报,2013(4):449-456. |
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作者姓名: | 周方永 李岩 薄新文 马勋 |
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作者单位: | 石河子大学动物科技学院;新疆兵团畜牧兽医工作总站;新疆农垦科学院 |
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基金项目: | 国家科技支撑计划项目(2012BAD43B02) |
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摘 要: | 为了建立一种快速区分鉴定结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,以分支杆菌属特异基因32kD,结核分枝杆菌种特异基因MTP40和结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110为目标基因,设计合成3对特异性引物,以结核分枝杆菌标准株DNA为模板,通过对PCR反应体系中DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶浓度5个因素的正交设计,以及PCR反应条件中各反应参数的优化,建立了鉴别分支杆菌的多重PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行了验证。结果显示:该方法对结核分枝杆菌标准株H37Ra能扩增出506、396和984bp,对卡介苗(BCG)能扩增出506和984bp片段,对禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌、龟分支杆菌能够扩增出506bp片段,对大肠杆菌等的扩增结果均为阴性。建立的多重PCR敏感度最低可检出6.6×10-6 ng。结论:该方法具有特异性高、敏感性好等特点,可用于奶牛结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别诊断。
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关 键 词: | 分枝杆菌 多重PCR 假阳性 正交设计 |
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