| GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 德吉央宗,李勇.GST-MIG，GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达[J].北华大学学报(自然科学版),2013(4):413-417. |
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| 作者姓名： | 德吉央宗 李勇 |
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| 作者单位： | 西藏大学医学院,西藏拉萨,850000;西藏大学医学院,西藏拉萨,850000 |
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| 摘 要： | 目的探讨GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达.方法高压水动力尾静脉注射pCMV-tag2B空载质粒的12只小鼠为对照组,注射pCMV-tag2B-HBx质粒的12只小鼠为观察组.采用Elisa法检测IFN-γ表达;采用免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG,IP-10表达;扩增MIG,IP-10基因至pET42a,构建载体后行IPTG诱导表达;采用PAGE和Western blot法鉴定蛋白表达;采用GST柱纯化表达蛋白。结果对照组小鼠肝脏中无MIG,IP-10表达,观察组小鼠肝脏中有MIG,IP-10表达;观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21.4%,对照组降低了54.1%,与小鼠肝脏中MIG,IP-10表达一致;MIG基因条带为330 bp,IP-10基因条带为246 bp,经重组质粒测序模版检测,并与Blast进行对比,测序结果与目的基因一致;未诱导组无蛋白表达,pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达(26 kD),pET42a-mMIG,pET42a-mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG,mIP-10表达;25℃下,IPTG质量浓度为0.2 mmol/L,转速为150 r/min,GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白含量最高;上清经15%SDS-PAGE检测可提高目的蛋白纯度;采用Western blot检测融合蛋白,经GST柱纯化后可见融合蛋白条带.结论 GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白原核载体可成功构建,具有高效表达特征,为制备抗体提供了良好条件.
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| 关 键 词： | GST-MIG GST-IP-10 融合蛋白 原核载体 构建与表达 |
Construction and Expression of GST-MIG,GST-IP-10 Fusion Protein Protokaryon Vector |
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| DEKYLI Yang-zom
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LI Yong.Construction and Expression of GST-MIG,GST-IP-10 Fusion Protein Protokaryon Vector[J].Journal of Beihua University(Natural Science),2013(4):413-417. |
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| Authors: | DEKYLI Yang-zom LI Yong |
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| Institution: | (Medical School of Tibet University,Lasa 850000,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GST-MIG GST-IP-10 fusion protein prokaryotic vector construction and expression |
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