| 黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA的克隆和序列分析及其在大肠杆菌中的表达(英文) |
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| 引用本文： | 李文清,罗进贤,张添元,何玲.黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA的克隆和序列分析及其在大肠杆菌中的表达(英文)[J].中山大学学报(自然科学版),1992(2). |
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| 作者姓名： | 李文清 罗进贤 张添元 何玲 |
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| 作者单位： | 中山大学生物学系/生物工程中心 |
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| 基金项目： | 国家“七五”重点科技攻关项目资助 |
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| 摘 要： | 以poly(A)~ mRNA为模板,噬菌体λgt 10 DNA为载体构建了黑曲霉3758的cDNA的文库。用编码黑曲霉葡萄糖淀粉酶329—418位氨基酸的DNA顺序(456bp)作探针从该文库中筛选葡萄糖淀粉酶cDNA。采用原位噬菌斑杂交法获得11个阳性噬菌斑,从其中6个噬菌体中提取DNA进行限制酶切分析和印迹法转移杂交试验,发现这些阳性噬菌体DNA含有不同大小的插入片段,它们都能与DNA探针杂交,表明已克隆了葡萄糖淀粉酶的cDNA。采用单酶切及交叉双酶切法制定了2.1kbcDNA的物理图并对2.1kb片段作了全序列分析。序列分析结果显示,克隆的2.1kb片段含5＇端非编码区,编码葡萄糖淀粉酶的结构基因及3＇端非编码区。克隆的cDNA片段转移至表达载体λgt11,感染大肠杆菌后,产生的噬菌斑转移硝酸纤维素滤膜后与~(125)I标记的抗葡萄糖淀粉酶抗体进行免疫反应,结果证明含2.1kbcDNA的λgt11表现葡萄糖淀粉酶阳性.2.1kb片段也曾转至质粒pPL2,转化大肠杆菌JF1125。细胞裂解物在SDS-PAGE电泳中可看到新的蛋白带。这些结果表明,克隆的黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA可以在大肠杆菌中表达。
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| 关 键 词： | 黑曲霉 葡萄糖淀粉酶 cDNA克隆 序列分析 基因表达 大肠杆菌 |
Cloning, Sequencing of Glucoamylase cDNA from Aspergillus niger and It's Expression in E.coli |
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| Li Wenqing,Luo Jinxian,Zhang Tianyuan,He Ling.Cloning, Sequencing of Glucoamylase cDNA from Aspergillus niger and It's Expression in E.coli[J].Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni,1992(2). |
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| Authors: | Li Wenqing Luo Jinxian Zhang Tianyuan He Ling |
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| Institution: | Li Wenqing;Luo Jinxian;Zhang Tianyuan;He Ling Department of Biology and Biotechnology Research Centre |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | cloning sequencing expression glucoamylase cDNA Aspergillus niger E coli |
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