| 靶向hTERT的shRNA腺病毒载体的构建及其对MCF-7细胞hTERT表达的影响 |
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| 引用本文： | 刘岚,陈绍坤,税青林,赵小平,黄燕,余红.靶向hTERT的shRNA腺病毒载体的构建及其对MCF-7细胞hTERT表达的影响[J].四川大学学报(自然科学版),2008,45(1):193-198. |
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| 作者姓名： | 刘岚 陈绍坤 税青林 赵小平 黄燕 余红 |
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| 作者单位： | 泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室;泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室;泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室;泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室;泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室;泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室 |
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| 基金项目： | 四川省教育厅自然基金重点资助项目(2006A054) |
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| 摘 要： | 设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列GGAACACCAAGAAGTTCATCT,构建siRNA表达质粒PgenesilhTERT;随后将shRNA表达框克隆到入门载体pENTRTM1A,构建重组质粒pENTR/U6-hTERT-polyA;使用同源重组方式在体外将该表达框重组到腺病毒载体pAd/PL-DEST,得到重组腺病毒质粒pAd/U6 –TERT-polyA;线性化的重组腺病毒质粒在HEK 293细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒rAd-hTERT.同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照rAd-HK,空病毒对照rAd-blank和只含EGFP的rAd -EGFP.四种病毒经酶切、电泳分析表明插入序列正确,腺病毒载体构建成功.Western blotting测定转染后各组hTERT蛋白的表达情况,证实转染rAd-hTERT 48 h后,hTERT的表达明显被抑制.实验表明基于Gateway技术的腺病毒介导的shRNA载体构建成功,rAd-hTERT可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞hTERT基因的表达.本研究为针对端粒酶的基因治疗奠定了实验基础.
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| 关 键 词： | 基因 hTERT RNA干扰 腺病毒载体 Gateway 技术 |
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