| 人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 尹吉伟,岳俊杰,李森,井健.人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达[J].北京师范大学学报(自然科学版),2007,43(5):554-557. |
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| 作者姓名： | 尹吉伟 岳俊杰 李森 井健 |
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| 作者单位： | 北京师范大学生命科学学院,100875,北京;军事医学科学院,100075,北京 |
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| 摘 要： | 采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138～139位点插入了赖氨酸甘氨酸天冬氨酸(KGD)序列的2种尿激酶原嵌合体基因(proUK-KGDW, proUK-KGDS),并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34 μkat·mL-1, 细胞密度为106·mL-1,表达高峰期表达产物占细胞总蛋白的15%以上.表达产物展示出较高的纤溶活性,并具有良好的人尿激酶原免疫原性,同时,经SDS-PAGE试验检测,昆虫细胞分泌的突变体相对分子质量符合理论预期,为5.4×104,绝大多数为单链态形式.经过离子交换、分子筛层析及超滤浓缩等步骤对突变体蛋白进行了初步纯化,光浊度法试验表明含有KGDW序列的尿激酶原突变体具有较强的血小板聚集抑制活性,而含有KGDS序列的突变体几乎不具有任何活性,表明羧基端边侧序列对KGD展示正常的受体结合活性影响较大.溶解圈试验表明2种突变体均保留了较高的纤溶活性,说明插入序列不影响尿激酶原的酶切活性.
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| 关 键 词： | 尿激酶原 KGD序列 边侧序列 纤溶活性 血小板聚集抑制活性 |
| 修稿时间： | 2007-03-05 |
CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF TWO KINDS OF HUMAN PROUROKINASE MUTANT CONTAINING SPECIAL KGD-SEQUENCE |
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| Yin Jiwei,Yue Junjie,Li Sen,Jing Jian.CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF TWO KINDS OF HUMAN PROUROKINASE MUTANT CONTAINING SPECIAL KGD-SEQUENCE[J].Journal of Beijing Normal University(Natural Science),2007,43(5):554-557. |
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| Authors: | Yin Jiwei Yue Junjie Li Sen Jing Jian |
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| Institution: | 1 College of Life Sciences, Beijing Normal University, 100875, Beijing, China ; 2 Aeademy of Military Medicine, 100075, Beijing, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | prourokinase KGD sequence flanking sequence fibrinolytic activity inhibitory activity of platelet aggregation |
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