| 克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定 |
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| 引用本文： | 易海涛,夏立新,刘芳,闫浩,黄钟,汤慕瑾,陈大玮,刘志刚. 克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定[J]. 江西师范大学学报(自然科学版), 2011, 35(3): 280-285 |
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| 作者姓名： | 易海涛 夏立新 刘芳 闫浩 黄钟 汤慕瑾 陈大玮 刘志刚 |
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| 作者单位： | 深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所,广东深圳,518060 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，深圳出入境检验检疫局科技计划，深圳市深港创新圈项目和深圳大学创新团队基金 |
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| 摘 要： | 克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.
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| 关 键 词： | 克氏原螯虾 原肌球蛋白 变应原 克隆表达 纯化 免疫印迹 酶联免疫吸附测定 |
The Cloning Expression, Purification and Characterization of a Fragment of Red Swamp Crayfish Major Allergen Tropomyosin |
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| YI Hai-tao,XIA Li-xin,LIU Fang,YAN Hao,HUANG Zhong,TANG Mu-jin,CHEN Da-wei,LIU Zhi-gang. The Cloning Expression, Purification and Characterization of a Fragment of Red Swamp Crayfish Major Allergen Tropomyosin[J]. Journal of Jiangxi Normal University (Natural Sciences Edition), 2011, 35(3): 280-285 |
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| Authors: | YI Hai-tao XIA Li-xin LIU Fang YAN Hao HUANG Zhong TANG Mu-jin CHEN Da-wei LIU Zhi-gang |
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| Affiliation: | * (Allergy and Immunology Institute,Medical School,Shenzhen University,Shenzhen Guangdong 518060,China) |
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