| HSV/AAV嵌合病毒法制备rAAV/hFⅨ及其安全性检测 |
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| 引用本文： | 陈立,邹蓓艳,陈浩明,伍志坚,吴小兵,卢大儒,薛京伦.HSV/AAV嵌合病毒法制备rAAV/hFⅨ及其安全性检测[J].科学通报,2003,48(10):1054-1058. |
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| 作者姓名： | 陈立 邹蓓艳 陈浩明 伍志坚 吴小兵 卢大儒 薛京伦 |
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| 作者单位： | 1. 基因工程国家重点实验室,复旦大学生命科学院遗传学研究所,上海,200433
2. 中国预防医学科学院病毒学研究所,北京,100052 |
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| 摘 要： | 构建了由CMV启动子调控的人凝血因子Ⅸ小基因的重组腺相关病毒载体, 并通过HSV/AAV杂合辅助病毒的方法大量制备成重组腺相关病毒颗粒(rAAV/hFⅨ). 经Southern dot blot及QC-PCR法测定, 滴度达到3.6 × 1012 vg(病毒基因组)/mL. 将rAAV/hFⅨ病毒以7.5 × 1011 vg/只直接注射到血友病B小鼠股四头肌中, 检测到人Ⅸ因子最高表达量达到387 ng/mL血浆, 持续表达时间12周. 血浆中产生的抗体情况与表达曲线相吻合. 实验结果表明, 采用HSV/AAV杂合辅助病毒法能够有效解决AAV载体的大量制备问题, QC-PCR法检测重组腺相关病毒的滴度比传统的点杂交法更加快速准确. RT-PCR检测表明重组AAV中没有野生型HSV的污染, PCR检测表明重组AAV注射后, 重组AAV病毒仅存在于注射点附近的肌肉中, 未见扩散.
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| 关 键 词： | 重组腺相关病毒载体 人凝血因子Ⅸ小基因 杂合病毒 QC-PCR |
| 收稿时间： | 2002-09-04 |
| 修稿时间： | 2002年9月4日 |
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