基于Omp25基因和环介导等温扩增技术检测布鲁氏菌方法的建立

目的建立灵敏、特异、快速的LAMP检测布鲁氏菌的方法。方法基于布鲁氏菌保守的Omp25序列设计了4套引物,根据文献合成了基于此序列的3套引物,利用7套引物建立了检测方法;应用浊度法和电泳法对4种布鲁氏菌进行检测,确定最佳引物;通过对4种布鲁氏菌和其它17种常见菌同时进行检测评价方法的特异性;通过对不同稀释浓度的4种布鲁氏菌的DNA进行LAMP检测以确定方法的灵敏度。结果本研究新设计的一套引物被确定为最佳引物;用建立的LAMP法对17种常见菌株进行扩增,结果均为阴性,本方法具有很高的特异性;LAMP法检测猪种S2、羊种M5、牛种104 M和布鲁氏菌犬种55226四种布鲁氏菌DNA的灵敏度分别为5×10-4、5×10-5、5×10-3ng/μL和5×10-4ng/μL;检测反应在30 min以内完成。结论本方法具有快速、灵敏、特异的特点,有望成为快速检测布鲁氏菌的有效手段。