| 用基因重组α-半乳糖苷酶进行B→O血型改造 |
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| 引用本文： | 章扬培.用基因重组α-半乳糖苷酶进行B→O血型改造[J].科学通报,2003,48(1):43-47. |
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| 作者姓名： | 章扬培 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，军事医学科学院野战输血研究所，第一军医大学南方医院，第一军医大学南方医院 北京 100850，北京 100850，北京 100850，北京 100850，北京 100850，北京 100850，北京 100850，北京 100850，北京 100850，广州 510515，广州 510515 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(批准号:102-09-04-02)，国家重点基础研究发展规划(批准号:2002CB713800)，全军“十五”重点课题资助项目 |
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| 摘 要： | α-半乳糖苷酶是进行B→O血型改造的工具酶. 采用RT-PCR方法, 从中国海南Catimor咖啡豆中克隆了全长1.1 kb的α-半乳糖苷酶cDNA, 并构建了其表达载体. 电穿孔法将载体导入毕赤酵母GS115细胞, 筛选出重组α-半乳糖苷酶菌株. 离子交换层析纯化出α-半乳糖苷酶, 酶比活性从15 U/mg 提高到28.14 U/mg. 进一步鉴定了酶的生物化学性质, 其Km = 0.275, Vmax = 0.014 mmol·L-1·min-1. 据此确定了B→O血型改造的条件: pH 5.5~5.6, 每毫升红细胞使用100 U α-半乳糖苷酶, 26℃, 4 h. 经动物输血实验初步证明, 酶解反应后的通用O型血(enzymatically converted group O red blood cells, ECORBC)是安全的.
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| 关 键 词： | B → O血型改造 重组α-半乳糖苷酶 |
| 收稿时间： | 2002-08-12 |
| 修稿时间： | 2002年8月12日 |
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