结核分枝杆菌ESAT6基因真核表达载体的构建及表达 |
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引用本文: | 李跃峰,付强,张俊波,史慧君,李志强,程婷婷,张辉,曹旭东,陈创夫.结核分枝杆菌ESAT6基因真核表达载体的构建及表达[J].石河子大学学报,2013(3):318-322. |
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作者姓名: | 李跃峰 付强 张俊波 史慧君 李志强 程婷婷 张辉 曹旭东 陈创夫 |
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作者单位: | 石河子大学动物科技学院;新疆地方与民族病高发病教育部重点实验室;石河子大学医学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31060333);石河子大学高层次人才科研启动资金专项(RCZX201027) |
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摘 要: | 为了研究结核杆菌毒力因子ESAT6在结核杆菌感染细胞过程中的功能。采用分子生物学方法,根据Gen-Bank中登录的结核杆菌H37Rv的ESAT6基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到ESAT6基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM18-T载体中,测序验证后,再将ESAT6基因亚克隆至pEGFP-N1中,经核苷酸序列测定和酶切鉴定获得重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6。用重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6转染293T细胞。结果显示:重组表达质粒pEGFP-N1-ESAT6测序结果正确,转染细胞后出现绿色荧光,经Western blot分析鉴定,可见约35kDa的预期蛋白条带,证实ESAT6-EGFP融合蛋白在293T细胞中获得了表达。研究结果为进一步研究毒力因子ESAT6在感染宿主细胞中所发挥胞内生存机制奠定了基础。
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关 键 词: | 结核病 ESAT6 CFP10 |
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