完全体外化牛细胞核移植的研究

本研究探讨了用体外成熟卵母细胞和体外受精胚胎进行核移植的可能性。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的卵巢中抽取卵球－卵母细胞复合体，采用以前报道的方法（石德顺等，广西农业大学学报’１９９４：１３：１－５）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ卵母细胞和ＩＶＦ胚胎，体外成熟２３－２４ｈ后，在含０．１％透明质酸酶的无钙镁ＰＢＳ（ＰＢＳ）内，用细管反复吹打去掉卵丘细胞。选择具有明显第一极体的卵母细胞通过显微操作移去第一极体及其附近约一半的细胞质进行去核，去核的卵细胞在成熟液内继续培养到ＩＶＭ３０ｈ．体外发育到８－３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．供体胚胎用含０．２５％Ｐｒｏｎａｓｅ（溶于ＰＢＳ￣－）溶解透明带，并用细管吹打将其分散成单个卵裂球，在ＩＶＭ３０ｈ将单个卵裂球显微注入去核卵母细胞的卵周隙内，并在ＩＶＭ３１ｈ用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ两次电脉冲（间隔１秒）来诱导卵裂球与去核卵母细胞的融合。融合卵在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果，经体外培养５－８天后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体．２个月后直检妊娠情况．本实验中共操作１９４枚卵母细胞，

STUDY ON THE BOVINE NUCLEAR TRANSFR IN THE WHOLE IN VITRO PROCEDURE