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| 常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因 | |
| 引用本文： | 戚金亮,马小娟,王丽,印莉萍,韩振海.常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因[J].首都师范大学学报(自然科学版),2004,25(1):55-59. |
| 作者姓名： | 戚金亮 马小娟 王丽 印莉萍 韩振海 |
| 作者单位： | 1. 中国农业大学农学与生物技术学院果树分子生物学实验室,北京,100094;首都师范大学生物系遗传与生物工程重点实验室,北京,100037 2. 首都师范大学生物系遗传与生物工程重点实验室,北京,100037 3. 中国农业大学农学与生物技术学院果树分子生物学实验室,北京,100094 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目 ( 3 0 170 5 5 2 )，教育部“高等院校青年 教师科教奖励”基金，北京市自然科学基金委重点实验室“果树逆境生理研究室”资助项目 |
| 摘 要： | 首先根据Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因家族的保守区设计同源的常规PCR引物(F1，R1)，扩增出490bp的特异片段。然后根据RACE法原理，巧妙地设计3′RACE(F2)和5′RACE(R3)特异性引物，使两者既能分别与文库载体上的筛选扩增引物配对扩增cDNA 3′和5′末端序列，又能使扩增出的3′RACE和5′RACE产物序列有重叠部分；另外设计引物时还兼顾到使F2和R3也能配对，从而能对3′RACE和5′RACE扩增产物进行双特异性引物常规PCR鉴定。该方案不但能够直接根据序列鉴定3′RACE和5′RACE产物是否为同一基因序列，还能快捷地用常规PCR鉴定3′RACE和5′RACE扩增产物是否为特异性扩增，避免了对非特异性扩增产物的克隆测序等繁琐的鉴定过程，优化了基因克隆策略。最后根据拼读出的全长序列设计引物(F4，R4)扩增出完整编码区。应用该方法成功地从小金海棠缺铁处理的根系cDNA文库中克隆了Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因的cDNA。说明该方案是一种从cDNA文库中克隆目的基因的快捷优化方法。 |
| 关 键 词： | PCR RACE cDNA克隆 cDNA义库 Fe（Ⅱ）-转运蛋白基因 |
| 修稿时间： | 2003年3月24日 |
Rapidly Cloning Gene from cDNA Liprary Using Common PCR and RACE Combined Method |
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| Qi Jinliang , Ma Xiaojuan Wang Li Yin Liping Han Zhenhai.Rapidly Cloning Gene from cDNA Liprary Using Common PCR and RACE Combined Method[J].Journal of Capital Normal University(Natural Science Edition),2004,25(1):55-59. | |
| Authors: | Qi Jinliang Ma Xiaojuan Wang Li Yin Liping Han Zhenhai |
| Institution: | Qi Jinliang 1,2 Ma Xiaojuan 2 Wang Li 2 Yin Liping 2 Han Zhenhai 1 |
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