| GGPPS基因干扰腺病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 赵银娟,来珊珊,李朝军,薛斌.GGPPS基因干扰腺病毒载体的构建及鉴定[J].南京师大学报,2013(2):104-107,112. |
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| 作者姓名： | 赵银娟 来珊珊 李朝军 薛斌 |
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| 作者单位： | 南京林业大学森林资源与环境学院江苏省有害生物入侵与控制重点实验室;南京大学医学院江苏省医学分子技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学青年基金(31100448);博士点基金(2113204120004) |
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| 摘 要： | 构建GGPPS基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据GGPPS基因序列设计GGPPS干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-SiGGPPS干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞CPE,用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建GGPPS基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.995×107PFU/mL.GGPPS在人中具有保守性,该病毒能在人源的WRL-68细胞中成功表达,并且对GGPPS基因干扰效率达70%以上.
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| 关 键 词： | GGPPS基因 干扰 腺病毒 |
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