| 流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性 |
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| 引用本文： | 方曙光,黄立,储炬,庄英萍,张嗣良.流式细胞仪检测重组毕赤酵母发酵过程中的细胞活性[J].华东理工大学学报(自然科学版),2006,32(9):1046-1049. |
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| 作者姓名： | 方曙光 黄立 储炬 庄英萍 张嗣良 |
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| 作者单位： | 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,国家生化工程技术研究中心,上海,200237 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)
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国家科技专项基金 |
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| 摘 要： | 建立了流式细胞仪检测重组巴斯德毕赤酵母(P.p astoris)细胞活性的方法,并在高密度发酵过程中得到应用。使用碘化丙锭染色法测定细胞活性,发现甲醇诱导时酵母细胞活性开始下降,随着细胞密度的增加,由于细胞胁迫和甲醇的影响,细胞活性明显下降,活细胞率最大下降了14%。与此同时,细胞生长减缓,目的蛋白发生降解,表明细胞活性与发酵过程中细胞的生长和目的蛋白生成等参数密切相关。实验证明:流式细胞仪可作为检测毕赤酵母发酵过程中细胞活性参数的一个便捷精确的有力工具。
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| 关 键 词： | 流式细胞仪 毕赤酵母 活细胞率 高密度发酵 |
| 文章编号： | 1006-3080（2006）09-1046-04 |
| 收稿时间： | 2005-09-12 |
| 修稿时间： | 2005年9月12日 |
Assessing Viability of Recombinant Pichia pastoris in Fermentation Process with Flow Cytometry |
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| FANG Shu-guang,HUANG Li,CHU Ju,ZHUANG Ying-ping,ZHANG Si-liang.Assessing Viability of Recombinant Pichia pastoris in Fermentation Process with Flow Cytometry[J].Journal of East China University of Science and Technology,2006,32(9):1046-1049. |
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| Authors: | FANG Shu-guang HUANG Li CHU Ju ZHUANG Ying-ping ZHANG Si-liang |
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| Abstract: | This paper describes the establishment of flow cytometric methods to assess the viability for recombinant methylotrophic P.pastoris strains and its application to a lab scale high cell density fermentation.Using a recombinant strain expressing human reteplase(hrPA),the cell viabilities were measured with propidium iodide staining.The cell viability decreases significantly by 14% during the methanol(induction) phase,indicating there was a stress situation triggered by the fermentation conditions.These(data) demonstrate that cell viability is an important physiological parameter and flow cytometry is a power-(ful) tool for the analysis and optimization of recombinant protein production processes expressed with P.(pastoris.) |
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| Keywords: | flow cytometer methylotrophic P pastoris cell viability high cell density culture |
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